[发明专利]一种微囊藻毒素的液相色谱-串联质谱检测方法

权利要求书

1.一种微囊藻毒素的液相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于，包括下列步骤：

(1)样品前处理

准确称取经过粉碎、均质过的藻类保健品1.0 g，用10 mL 60 %甲醇水溶液提取毒素，200 rpm摇床震荡60 min，再超声处理30 min，20 ℃以下8000 rpm离心10 min，取上清液；

调节上清液pH值至4.0，静置3 h可观察到溶液中出现大量絮状沉淀，20 ℃以下8000 rpm离心10 min，得到浅黄色上清液或无色透明液，溶液中加入稀氨水将 pH 值调至6.8-7.2，随后加入超纯水准确定容至30 mL，此时得到较为纯净的粗提液；

 (2)富集和净化

首先以10 mL甲醇和10 mL超纯水活化C18固相萃取柱，活化过程流速控制在1-2滴/秒，取15 mL粗提液注入C18固相萃取柱进行富集，流速控制在1滴/秒，接着再分别以20 %和30 %甲醇水溶液各 10 mL淋洗C18固相萃取柱，以去除杂质，最后以5 mL 70 %甲醇水溶液（含有0.05 %甲酸）洗脱微囊藻毒素，氮气吹至近干，以50 %乙腈水溶液定容至0.5 mL，待液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）检测；

（3）LC-MS/MS检测

    液相条件  Waters Atlantis dC18色谱柱（2.1 mm×150 mm，5μm），柱温30 ℃；进样量20 μL；流动相A为水（含有0.05%甲酸，5 mmol/L甲酸铵），B为95 %乙腈（含有0.05%甲酸，5 mmol/L甲酸铵）；梯度洗脱；

质谱条件  离子化方式为电喷雾离子化正模式（ESI+）；多反应监测模式（MRM）；碰撞气压力（CAD）：8；气帘气压力（CUR）：15；电喷雾电压（IS）：5000 V；离子源温度（TEM）：600 ℃。

2.根据权利要求1所述的微囊藻毒素的液相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于，步骤（1）溶液中加入稀氨水将 pH 值调至7.0。

3.根据权利要求1所述的微囊藻毒素的液相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于，步骤（1）中以2 mol/L甲酸调节上清液pH值至4.0。

4. 根据权利要求1所述的微囊藻毒素的液相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于，步骤（3）中以[M+2H]²⁺离子作为母离子。