[发明专利]一种检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒

权利要求书

1. 一种检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒，其特征在于，由定量RT-PCR反应液、酶混合液、引物探针混合液、CVA6标准品、CVA10标准品、CVA6强阳性对照品、CVA10强阳性对照品、CVA6弱阳性对照品、CVA10弱阳性对照品、阴性对照品组成；其中定量RT-PCR反应液有PCR反应缓冲液、氯化镁和三磷酸脱氧核糖核苷酸混合物，酶混合液含耐热Taq DNA聚合酶、RNA酶抑制剂和MMLV逆转录酶，引物探针混合液包含CVA6、CVA10两组特异性引物和相应的CVA6、CVA10两种荧光标记的特异性探针，阴性对照为高温高压灭菌的焦碳酸二乙酯处理水，CVA6、CVA10强阳性对照品和CVA6、CVA10弱阳性对照品为包含CVA6、CVA10的保守区基因序列的阳性质粒样品；

特异性引物及特异性探针序列如下：

上游引物CVA6-F: 5’- AARCCRGATAGYAGGAAATC-3’，

下游引物CVA6-R：5’- GGGGTGGATCACTCAATTTTG-3’，

特异性探针CVA6-P: 5’-FAM- CAATGGCAGACTGCYACYAAYCCGTCG-BHQ1-3’，

上游引物CVA10-F: 5’- GAGACTGGACGYGTRCCA-3’，

下游引物CVA10-R: 5’- GGGTYTCAATCATGTTYTCATCTG-3’，

特异性探针CVA10-P: 5’-HEX- CAGAGACRGGTGCCACWTCTAAYGCC-BHQ1-3’。

2. 一种检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒，其特征在于，CVA6、CVA10的特异性探针分别采用FAM、HEX两种荧光标记。

3. 一种检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒，其特征在于，CVA6、CVA10标准品的保守区基因序列如下：

CVA6标准品序列为：

GTATGTACCACCAGGGGCCCCTAAACCGGATAGTAGGAAATCATACCAATGGCAGACTGCTACTAACCCGTCGGTATTCGCAAAATTGAGTGATCCACCCCCCCAGGTGTCTGTCCCGTTCAT，

CVA10标准品序列为：

CCACTCCCAGTTCACACCGATTAGAGACTGGACGCGTGCCAGCGCTACAGGCTGCAGAGACGGGTGCCACTTCTAATGCCACAGATGAGAACATGATTGAAACCCGTTGTGTGGTTAACAGAA。

4. 一种检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒，其特征在于，引物探针混合液保存在棕色管。

5. 一种检测柯萨奇病毒A6、A10型的荧光定量试剂盒，其特征在于，所述试剂盒需于-20℃储存，尽量减少反复冻融。