[发明专利]一种含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法

权利要求书

1.一种含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法，其特征在于：利用层层组装制备表面呈负电性的复合膜，再通过静电结合作用使包裹有水通道蛋白的正电性的磷脂囊泡溶液在复合膜上铺展形成磷脂双层膜。

2.根据权利要求1所述的含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：

（1）制备基膜：将聚丙烯腈溶解在极性溶剂N，N-二甲基甲酰胺中，加入致孔剂，加热搅拌12～48h，冷却脱泡12～48h，在20～30℃的恒温、湿度60～80%的恒湿环境下，将配制好的铸膜液在玻璃板上刮膜，刮好后浸入凝胶浴成膜，再经漂洗后，浸入碱溶液中进行碱处理，得到表面带负电荷的基膜； 

   （2）制备层层组装复合膜：将步骤（1）处理好的基膜用超纯水洗涤后先后浸入带正电的高分子溶液与带负电的高分子溶液中，通过静电作用制备表面呈负电性的复合纳滤膜；

   （3）制备磷脂囊泡溶液：按比例取1，2-二油酰基磷脂酰胆碱、1，2-二油烯氧基-3-三甲氨基丙烷（阳离子脂质体）混合氯仿溶液于烧瓶中，用高纯氮气气流将其中的氯仿缓慢吹干，然后将烧瓶浸入恒温水浴中，连接真空泵真空干燥；向干燥后的烧瓶中加入PBS缓冲溶液，经震荡和超声，得到磷脂囊泡溶液；

   （4）引入水通道蛋白：将步骤（3）所制得的磷脂囊泡溶液与配制好的水通道蛋白溶液（0.008 mg/ml）/甘油（0.1mg/ml）/n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷（0.01mg/ml）按比例混合，加入1%的n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷，再将所得溶液放入PBS缓冲溶液中渗析三天，得到纯净的含水通道蛋白的蛋白脂质体；

   （5）制备含水通道蛋白磷脂仿生膜：将步骤（2）制备好的复合纳滤膜浸入步骤（4）所制备的含水通道蛋白的磷脂囊泡溶液中铺展，完成制备。

3.根据权利要求2所述的含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中的碱溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化锂中的一种或者几种。

4.根据权利要求2所述的含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中所制备的基膜为羟基化的聚偏氟乙烯膜、磺化聚砜膜、磺化聚醚砜膜、磺化聚醚醚酮膜、聚酰胺-酰亚胺膜、聚哌嗪酰胺膜中的一种。

5.根据权利要求2所述的含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，带正电的高分子溶液是聚乙烯亚胺、聚烯丙基胺盐酸盐、聚二烯丙基二甲基胺盐酸盐中的一种或者几种；带负电的高分子溶液是聚苯乙烯磺酸钠、聚丙烯酸钠盐中的一种或者几种。

6.根据权利要求2所述的含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中，制得的复合纳滤膜采用交联剂进行交联，交联剂为戊二醛、环氧氯丙烷、丙三醇三缩水甘油醚、甲苯二异氰酸酯中的一种或者几种。

7.根据权利要求2所述的含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中，使用的1，2-二油酰基磷脂酰胆碱能用二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、1-十六酰-SN-丙三醇-磷酸胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酸磷脂酰胆碱中的一种或者几种替代。

8.根据权利要求2所述的含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中，1，2-二油酰基磷脂酰胆碱与1，2-二油烯氧基-3-三甲氨基丙烷混合质量比为20%～80%。

9.根据权利要求2所述的含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中，加入的水通道蛋白与磷脂囊泡溶液的混合质量比分别为1：50或1：100或1：400。

10.根据权利要求2所述的含水通道蛋白的磷脂仿生膜的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中，水通道蛋白为水通道蛋白1、水通道蛋白z、水通道蛋白γ-TIP、水通道蛋白PIP、水通道蛋白NIP中的一种或几种。