[发明专利]鉴别水稻光温敏核不育基因p/tms12-1等位基因类型的共显性标记引物组及其应用有效
| 申请号： | 201410013547.5 | 申请日： | 2014-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN103789419A | 公开（公告）日： | 2014-05-14 |
| 发明（设计）人： | 李军;李白;高荣村 | 申请（专利权）人： | 浙江省嘉兴市农业科学研究院（所） |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡红娟 |
| 地址： | 314016 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鉴别 水稻 光温敏核 不育 基因 tms12 等位基因 类型 显性 标记 引物 及其 应用 | ||
1.一种共显性标记引物组，由四条引物组成，其特征在于，所述四条引物的碱基序列分别为：
PTGMS-F1：5’-CTTGCTACCACAAGCTTTCC-3’；
PTGMS-F2：5’-AGCAAAGAAGTGCATTGTTTGCGT-3’；
PTGMS-R1：5’-TCCTTCTGGACTAGGAGCAA-3’；
PTGMS-R2：5’-AAATTTTACTCTTGATGGATGGTGG-3’。
2.如权利要求1所述的共显性标记引物组在鉴别水稻光温敏核不育基因p/tms12-1等位基因类型中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，包括：
（1）取待检测水稻样品的组织，提取DNA；
（2）以所述的DNA为模板，利用如权利要求1所述的共显性标记引物组进行PCR扩增，获得PCR扩增产物；
（3）对所述的PCR扩增产物进行电泳，根据电泳结果进行判断：
若所述的电泳结果在497bp和227bp处显示特异性条带，则待检测水稻样品含有等位基因p/tms12-1；
若所述的电泳结果在497bp和317bp处显示特异性条带，则待检测水稻样品含有等位基因p/TMS12-1；
若所述的电泳结果在497bp、317bp和227bp处显示特异性条带，则待检测水稻样品同时含有等位基因p/tms12-1和p/TMS12-1。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增的体系为：10×PCR buffer，2μL；dNTP mixture，0.5μL；10μM PTGMS-F1引物，0.5μL；10μM PTGMS-F2引物，0.5μL；10μM PTGMS-R1引物，0.5μL；10μM PTGMS-R1引物，0.5μL；样品DNA1μL；Taq DNA聚合酶，0.2μL；补充无菌水至20μL。
5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增的条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s，62℃退火30s，72℃延伸1min，共36个循环；72℃延伸10min；4℃保温5min。
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