[发明专利]一种提取纯化垂丝海棠花中总黄酮的方法

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种植物中总黄酮的提取纯化方法，具体地说是一种提取纯化垂丝海棠花中总黄酮的方法。

二、背景技术

垂丝海棠（Malus Halliana Koehne）总黄酮药理研究表明，能增强组织抗氧化能力，降低四氯化碳引起的脂类过氧化，减轻肝纤维化程度；同时，还可以降低去势大鼠骨转换率和骨吸收程度，对绝经后骨质疏松具有防治作用。根据调查，国内尚无对垂丝海棠花总黄酮的提取和纯化工艺报道，仅有对海棠叶总黄酮的研究，是以回流方法提取，最佳工艺参数为：乙醇浓度50%、料液比1：50、浸提温度60℃、浸提时间4h，总黄酮含量为4.572%，此工艺存在乙醇用量大，提取温度高，提取时间长，且产品纯度低，达不到实际产品应用标准的问题。另外，由于花与叶药用部位主要成分的差异，工艺和技术路线无法通用，垂丝海棠叶总黄酮的提取工艺并不能直接应用于垂丝海棠花中总黄酮的提取。

三、发明内容

本发明旨在提供一种提取纯化垂丝海棠花中总黄酮的方法，所要解决的技术问题是提高垂丝海棠花中总黄酮的提取效率，并提高产物中总黄酮的得率和纯度。

本发明提取纯化垂丝海棠花中总黄酮的方法按以下步骤操作：

将垂丝海棠花干燥后破碎，加入10-20倍质量的70-80vt%（体积浓度，下同）乙醇溶液，密闭浸渍至少3小时，然后常温超声提取2-3次，合并提取液；将提取液浓缩至原体积的1-2%得到浓缩液，向浓缩液中加入等质量的AB-8大孔树脂混合并搅拌均匀，50-70℃烘干，上AB-8树脂柱，水洗至无色，再以75-85vt%的乙醇溶液淋洗，收集洗脱液，洗脱液减压浓缩并干燥后即得产物。

所述超声提取时的超声功率为1KW，超声时间为10-30min。第一次超声提取时的时间优选在20-30min，第二次以及第三次超声提取时的时间优选在10-20min。

本发明以芦丁为对照，应用紫外-可见分光光度法测定提取纯化后得到的产物中总黄酮的纯度，产物中总黄酮纯度达60%以上，计算公式如下：

总黄酮纯度：f%=｛[（Y×V₂）/V₁×V₀]/W｝×100

其中Y为测定的样品溶液浓度（mg/mL）；V₂为测定时稀释体积（mL）；V₁为测定吸光度样品溶液取样体积（mL）；V₀为样品溶液总体积（mL）；W为称取样品的重量（mg）。

总黄酮得率计算公式如下：

总黄酮得率：g%=G/W

其中G为提取纯化后得到的产物重量；W为垂丝海棠花的重量。

与传统技术相比，本发明的有益效果体现在：

1、本发明应用超声波提取，避免高温对有效成分的破坏。

2、本发明减少了超声提取的时间，并呈现较高的提取效率。

3、本发明利用AB-8大孔树脂的富集和纯化，可使提取的总黄酮的纯度达到60%以上，可直接应用于食品、保健品、药品、化妆品等领域。

四、附图说明

图1是本发明提取纯化后得到的产物的紫外-可见光谱（UV-Vis）扫描图。从图1中可以看出，吸收峰分别出现在401nm，361nm，273nm，符合黄酮带Ⅰ（300-400nm）、带Ⅱ（220-280nm）特征。

图2本发明提取纯化后得到的产物的高效液相色谱图（流动相－体积比20:80的水和甲醇，检测波长275nm，流速1.0ml/min，柱温25℃）。从图2中可以看出，纯化后的主要成分集中，杂峰少，黄酮成分纯度较高。

图3本发明提取纯化后得到的产物的红外光谱（IR）分析图。由图3可知，3380cm^-1处峰强而宽，符合黄酮羟基特征；1610cm^-1，1510cm^-1分别符合黄酮中羰基和苯环双键特征，1260cm^-1符合黄酮C-O特征。

五、具体实施方式

实施例1：

1、取3g垂丝海棠花干燥后切碎，加入10倍质量的75vt%的乙醇溶液，密闭浸渍3小时，超声提取2次，第一次20min，第二次20min，超声功率1KW，合并提取液，提取液中粗总黄酮得率为10.12%。提取液中粗总黄酮得率（g′）的计算公式为：g′%=G′/W，其中G′为提取液干燥后得到的干浸膏重量；W为垂丝海棠花的重量。