[发明专利]一种食品中莱克多巴胺含量的检测方法

权利要求书

1.一种食物中莱克多巴胺含量的检测方法，其特征在于包括下述步骤：

⑴制备捕获探针：

取0.08-0.12g平均粒径为1μm的Fe₃O₄磁珠分散在60-100mL乙醇和15-25mL水的混合液中，在35-53Hz下超声8-12min，加入0.8-1.2mL浓度为26-30wt%的氨水；随后，逐滴加入1.5-2.5ml正硅酸乙酯，180-220rpm机械搅拌，室温下反应10-14h；

通过磁性分离得到的纳米粒子用水和乙醇依次清洗3-5次，清洗干净溶液中不能被磁铁吸附的悬浮微粒，然后在50-70℃下真空干燥，得到包裹有二氧化硅层的Fe₃O₄磁珠Fe₃O₄@SiO₂；

向180-220mL无水甲苯中加入0.4-0.6g Fe₃O₄@SiO₂和1.8-2.2mL3-氨丙基三乙氧基硅烷，在100-140℃下搅拌10-14h，得到氨基化的Fe₃O₄@SiO₂；

向40-60ml pH7-7.5的PBS磷酸盐缓冲溶液中加入0.4-0.6g羧甲基化的β-环糊精、0.15-0.25g1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、0.15-0.25g N-羟基琥珀酰亚胺和上述得到的氨基化的Fe₃O₄@SiO₂，搅拌10-14h进行活化，得到Fe₃O₄@SiO₂-CD捕获探针；

⑵制备信号探针：

将0.8-1.2ml浓度为0.08-0.12mg/ml的莱克多巴胺抗体Ab加入到0.8-1.2ml Envision试剂（该名词在网络上查询不到，在教科书上有类似的名词吗）中，3-5℃下250-350rpm搅拌0.5-1h，得到复合物溶液；

取0.08-0.12ml上述复合物溶液加入到2-3ml胶体金溶液（浓度？）中，3-5℃下搅拌4.5-5.5h，11000-13000rpm离心10-15min后，弃去上清液，将沉淀分散在0.8-1.2ml pH7-7.5的PBS缓冲液中，得到Envision试剂（上述上溶液，这里是试剂，是否可统一为试剂）-抗体-胶体金复合物；

向0.8-1.2ml上述合成的Envision试剂-抗体-胶体金溶液中加入450-550μL浓度为8-12mg/ml的蔗糖酶溶液，于3-5℃下搅拌5-7h，11000-13000rpm离心10-15min后，弃去上清液，所得沉淀分散到0.8-1.2ml含有0.8-1.2wt%牛血清蛋白的pH为7-7.5的PBS缓冲液中，得到Envision试剂-抗体-胶体金-酶复合物，即为信号探针；

⑶莱克多巴胺的检测：

按常规方法处理待测样品，氮气吹干后用0.8-1.2mL pH7-7.5的PBS缓冲液重分散得到待测样品溶液；

将捕获探针Fe₃O₄@SiO₂-CD分散在含有浓度为0.8-1.2wt%的牛血清蛋白、pH7-7.5的PBS缓冲液，制备成浓度为0.8-1.2mg/mL的捕获探针分散液；

吸取0.8-1.2mL所述分散液加入到所述的混合溶液中，室温下振摇1.5-2.5h进行吸附，磁性分离后用PBS缓冲液冲洗2-5次；之后加入80-120μLEnvision试剂-抗体-胶体金-酶复合物，室温下振荡反应25-35min，磁性分离后所得沉淀物用缓冲液清洗后，加入45-55μL蔗糖溶液，室温下反应1.5-2.5h后，磁性分离出沉淀后吸取上层清液用血糖仪检测，记录血糖仪的读数；

（4）将得到的读数与标准曲线比对，即可得知所检测物质中莱克多巴胺的浓度。