[发明专利]抗虫棉花植物及其鉴定方法

权利要求书

1.鉴定生物样品中优良事件的方法，所述优良事件包含外源DNA，该外源DNA包含处于地下三叶草矮化病毒S7启动子控制下的SEQ ID No.20的经修饰cry1ab基因的编码序列，其中包含所述事件的参考种子以保藏号PTA-8171保藏在ATCC，所述方法包括

a)利用聚合酶链式反应用至少两种引物从存在于所述生物样品中的核酸扩增100到500bp的DNA片段，所述引物中一种识别所述优良事件的5‘侧翼区或所述优良事件的3‘侧翼区，所述5‘侧翼区具有SEQ ID No1的1-98位核苷酸的核苷酸序列或SEQ ID No16的1－563位核苷酸的核苷酸序列；所述的3‘侧翼区具有SEQ ID No2的41-452位核苷酸的互补序列的核苷酸序列，所述引物中另一种引物识别外源DNA内的序列，该外源DNA具有SEQ ID No1的99-334位核苷酸的互补序列的核苷酸序列或SEQ ID No2的1-40位核苷酸的核苷酸序列；或

b)将生物样品的核酸与所述优良事件的特异探针杂交，其中所述特异探针的序列与包含所述优良事件的5‘侧翼序列或3‘侧翼序列和与之相邻的外源DNA序列的部分的序列有至少80%序列同一性。

2.权利要求1的方法，其中所述识别5‘侧翼区的引物由在其3‘最末端包含SEQ ID No.6的核苷酸序列的核苷酸序列组成，并且其中所述识别外源DNA内序列的引物由在其最3‘末端包含SEQ ID No.3的核苷酸序列的核苷酸序列组成。

3.权利要求2的方法，其中所述方法包括使用所述优良事件的鉴定方案扩增约369bp的片段。

4.用于鉴定生物样品中优良事件的试剂盒，所述优良事件包含外源DNA，该外源DNA包含处于地下三叶草矮化病毒S7启动子控制下的SEQ ID No.20的经修饰cry1ab基因的编码序列，其中包含所述事件的参考种子以保藏号PTA-8171保藏在ATCC，所述试剂盒包含一种识别SEQ ID No1的1-98位核苷酸的核苷酸序列或SEQ ID No16的1-563位核苷酸的核苷酸序列的引物或一种识别SEQ ID No2的41-452位核苷酸的互补序列的核苷酸序列，和一种识别SEQ ID No1的99-334位核苷酸的互补序列的核苷酸序列或SEQ ID No2的1-40位核苷酸的核苷酸序列的引物。

5.权利要求4的试剂盒，其包含一种由在其3‘最末端包含SEQ ID No.6的核苷酸序列的核苷酸序列组成的引物和一种由在其最3‘末端包含SEQ ID No.3的核苷酸序列的核苷酸序列组成的引物。

6.权利要求1的方法，其中所述特异探针的序列与SEQ ID No1的78-119位核苷酸序列或SEQ ID No2的20-61位核苷酸序列或所述序列的互补序列有至少80%序列同一性。

7.用于鉴定生物样品中优良事件的试剂盒，所述优良事件包含外源DNA，该外源DNA包含处于地下三叶草矮化病毒S7启动子控制下的SEQ ID No.20的经修饰cry1ab基因的编码序列，其中包含所述事件的参考种子以保藏号PTA-8171保藏在ATCC，所述试剂盒包含能够特异杂交EE-GH5的特定区域的特异探针，其中所述特异探针的序列与包含EE-GH5的5‘侧翼序列或3‘侧翼序列和与之相邻的外源DNA序列的部分的序列有至少80%序列同一性。

8.权利要求7的试剂盒，其中所述特异探针的序列与SEQ ID No1的78-119位核苷酸或SEQ ID No2的20-61位核苷酸或所述序列的互补序列有至少80%序列同一性。

9.确认种子纯度的方法，所述方法包括用如权利要求1定义的特异引物或如权利要求8中定义的特异探针检测如权利要求1中表征的优良事件特异的区域，所述引物或探针特异识别种子样品中所述优良事件的5‘或3‘侧翼区。

10.筛选种子中如权利要求1表征的优良事件的存在的方法，所述方法包括用如权利要求1中定义的特定引物或如权利要求8中定义的特异探针检测所述优良事件特异的区域，所述引物或探针特异识别种子批次的样品中所述优良事件的5‘或3‘侧翼区。