[发明专利]抗虫棉花植物及其鉴定方法

说明书

本申请是申请日为2008年3月31日、发明名称为“抗虫棉花植物及其鉴定方法”的中国专利申请200880010892.6(国际申请号PCT/EP2008/002667)的分案申请。

发明领域

本发明涉及转基因棉花植物，植物材料及种子，其特征在于包含一个特定的转化事件，特别是在棉花基因组的特定部位存在编码可赋予昆虫抗性的蛋白的基因。本发明的棉花植物组合了昆虫抗性表型、农学性状、遗传稳定性、以及对不同遗传背景的适应性（等同于非转化棉花系在无昆虫状况下）。本发明进一步提供了在生物样品中鉴定特别包含了转化事件EF-GH5的植物材料的存在的方法和试剂盒。

发明背景

植物中转基因的表型表达取决于：基因本身的结构，以及其在植物基因组中的位置。同时，在基因组的不同位置转基因（外源DNA中）的存在将以不同的方式影响植物的整体表型。通过遗传操作，在农学上或工业上成功地将商业上感兴趣的性状引入到植物中是一个长期的过程，这取决于不同的因素。转基因植物的实际转化和再生仅仅是一系列选择步骤的第一步，选择步骤包括广泛的遗传表征，育种，田间试验评价，最终实现优良品系的选择。

棉纤维是全世界最重要的纺织原料。每年全球收获大约80,000,000英亩棉花。就面积产量而言，棉花是美国第五大作物，2000年其种植超过了15,000,000英亩。

靠棉花为生的最具破坏性的昆虫物种有：Helicoverpa zea（玉米果穗螟蛉或棉铃虫）、Helicoverpa armigera(美洲棉铃虫)、Heliothis virescens(烟青虫)及Helicoverpa punctigera。

鉴于对新型食品和新型饲料的关注，GMO和非GMO产品的分开，以及对专利材料的鉴别，优良事件的明确鉴定正变得愈加重要。理想的是，该鉴定方法既快又简单，还不需要大量的实验室设备。此外，该方法应提供不需专家解释就能使优良事件明确确定的结果，但是如果必要的话，在专家仔细审查下，结果被证明有效。本文描述了在生物样品中鉴定优良事件EF-GH5而用到的特定工具。

在开发抗虫棉(Gossypium hirsutum)过程中，从转基因棉花植物群体中将EE-GH5鉴定作为优良事件，它包含编码来自苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）的杀虫晶体蛋白的基因。转基因棉花植物包含编码Bt杀虫晶体蛋白（如WO03/093484所述）的嵌合基因，其处于植物可表达启动子的控制之下。

包含抗虫基因的棉花植物已经在本领域中公开。但是，并没有任何现有技术公开内容教导或提示了本发明。

发明概述

本发明涉及转基因棉花植物、或其种子、细胞或组织，其包含稳定整合在其基因组中的表达盒，该表达盒包含一个包含cry1Ab基因编码序列的抗虫基因（如本文实施例1.1所述），其为抗虫的，在无昆虫压力下，该转基因植物及其材料具有与非转基因的等基因系基本上等同的农学性能。在有昆虫压力下，该转基因植物将具有比非转基因植物优越的农学表型。

根据本发明，棉花植物、或其种子、细胞或组织包含优良事件EE-GH5。

更确切地说，本发明涉及转基因棉花植物、其种子、细胞或组织，其基因组DNA的特征在于，当用本文所述的PCR鉴定方法分析，使用两个分别针对EE-GH5的5‘或3‘侧翼区和外源DNA的引物时，得到特异于EE-GH5的片段。所述引物可以分别针对SEQ ID No：1的5‘侧翼区和外源DNA内，例如可以分别包含SEQ ID No：7和SEQ ID No：8的核苷酸序列或由其组成，得到100-700bp的DNA片段，优选大约129bp。该引物也可以分别针对SEQ ID No：2内的3‘侧翼区和外源DNA，例如可以分别包含SEQ ID No：3和SEQ ID No：6的核苷酸序列或由其组成，得到300-700bp的DNA片段，优选是大约369bp。