[发明专利]制备高手性纯(R)-3-哌啶醇及其衍生物的方法

权利要求书

1.制备高手性纯(R)-3-哌啶醇及其衍生物的方法，所述反应过程如下所示：

其特征在于：P为氢、叔丁氧羰基（-Boc）、苄氧羰基（-Cbz）或芴甲氧羰基（-Fmoc），所述反应条件为pH6.0-7.5，以共表达重组醇脱氢酶和重组葡萄糖脱氢酶及辅酶为催化剂，所述重组醇脱氢酶和重组葡萄糖脱氢酶催化剂为液体溶液、冻干粉、固定化酶或固定化细胞，所述重组醇脱氢酶的氨基酸序列如序列表SEQ.ID NO:1所示，所述重组葡萄糖脱氢酶氨基酸序列如序列表SEQ.ID NO:2所示。

2.根据权利要求1所述的制备高手性纯(R)-3-哌啶醇及其衍生物的方法，其特征在于：所述反应条件为PH6.4-6.6，所述重组醇脱氢酶和重组葡萄糖脱氢酶在基因工程菌中高效共表达。

3.根据权利要求1所述的制备高手性纯(R)-3-哌啶醇及其衍生物的方法，其特征在于：所述基因工程菌为具有重组载体pETDuet-1的大肠杆菌。

4.一种发酵培养如权利要求3所示的基因工程菌的方法，其特征在于：包括构建基因工程菌及基因工程菌的进一步发酵，所述基因工程菌的构建包括以下步骤：

对全基因合成的重组醇脱氢酶编码基因与葡萄糖脱氢酶编码基因分别经双酶切；再将其分别克隆至表达载体pETDuet-1的不同多克隆抗位点，重组质粒测序确认后，分别转化至表达大肠杆菌菌株，构建相应的重组菌株；

所述基因工程菌的进一步发酵包括如下步骤：

将以上所述的大肠杆菌菌株接种至含有氨苄青霉素的LB培养基中，培养至OD₆₀₀=0.8的新鲜培养液，加入过滤灭菌的氨苄青霉素溶液至终浓度为0.1mg/mL，37℃800rpm培养；培养2hr后补料，通过浓氨水/盐酸调节pH7.0±0.1，当培养液的OD₆₀₀达到25时，将罐温降至25℃，加入终浓度为1mmol/L IPTG，继续控制各培养条件诱导14hr，最后离心收获菌体。