[发明专利]检测胃癌的血清/血浆微小RNA标志物及其应用

说明书

技术领域

本专利属于生物技术和肿瘤学领域，涉及血清/血浆微小RNA（microRNA，简称miRNA）的应用，公开了一种用于检测胃癌的血清/血浆miRNA及其应用。

背景技术

胃癌是世界最常见的肿瘤之一，虽然近年来全球范围内胃癌的总体发病率呈下降趋势，但其绝对发病人数仍然很庞大，发病率和死亡率分别占居恶性肿瘤的第四位和第二位。在我国，胃癌发病率和死亡率居各类肿瘤之首。每年新诊患者人数达30万多，其中三分之二为进展期胃癌，且发病年龄具有明显的年轻化趋势。早期胃癌多无症状或仅有轻微症状，当临床症状明显时病情已属中晚期。胃癌的预后与分期分级密切相关。早期胃癌预后较好，术后5年存活率达90%以上；进展期胃癌的术后5年生存率只有20%～25%。然而只有7.5%的胃癌在早期被发现，所以胃癌的早期诊断是提高其存活率的关键和重要前提条件。

胃癌的诊断一般在临床症状的基础上，结合体征及内镜检查、X线钡餐检查、B型超声检查、CT检查、磁共振成像MRI检查和脱落细胞学检查，但这些方法在早期诊断上都有一定的缺陷：影像学检查对早期胃癌的诊断具有一定的局限性，内镜检查和脱落细胞检查取材不当或人为经验不足等都会导致误诊或漏诊。尽管已发现一些肿瘤标志物，如癌胚抗原（CEA）和糖类抗原（如CA19-9、CA74-2等）等，但对胃癌诊断的敏感度和特异度均有限，尤其在发现早期胃癌和鉴别侵袭性无痛性肿瘤方面(Madhavan et al.，2013)。因此，寻找新的特异性高和敏感性好的胃癌标志物越来越受到国内外的重视。

微小RNA（microRNA，miRNA）是一类长约20～25个核苷酸的非编码RNA，它参与肿瘤细胞的生物调控过程，在肿瘤的发生、发展过程中间接发挥着癌基因或者抑癌基因样作用。miRNA通过与靶mRNA的3’端非翻译区序列完全或部分互补结合，导致靶mRNA降解或转录后翻译抑制，从而调控靶基因的表达。

基因表达谱芯片开创了肿瘤miRNA表达谱研究的新领域。研究发现，miRNA在组织中的表达表现为显著的肿瘤相关性、组织特异性和表达稳定性，以此能更精确地进行组织和肿瘤类型的分类。miRNA的研究已经从传统的肿瘤分子机制的研究发展到临床应用的领域。13个基因芯片技术和生物信息学的研究发现了139个在胃癌组织及相应癌旁或正常组织中差异表达的miRNAs，其中有29个miRNAs在不同的研究中获得了一致的结果(Wang et al.，2012)。这些miRNAs可作为潜在的胃癌诊断生物标志物。但临床上大多胃癌症状出现时已属中晚期，无法实现肿瘤的早期诊断，而且组织样本取材具有创伤性，在临床上的应用存在一定的局限性。

研究发现，血清/血浆miRNA非常稳定，反复冻融、酸碱环境、煮沸、长期保存等均不会造成血清/血浆miRNA的损失，而且miRNA在外周血中的表达同样具有肿瘤相关性和组织特异性。循环miRNA检测损伤性小、灵敏度高、可重复性好、费用低，已有很多关于血清/血浆miRNA用于肿瘤早期检测和预后生物标志物的报道(Avila-Moreno et al.，2011;Qu et al.，2011;Cortez et al.，2012)，其作为肿瘤标志物具有良好的临床应用前景。近年来，已有研究发现了一些在胃癌患者血清/血浆中异常表达的miRNAs，提出这些血清/血浆miRNA可以作为一种非侵袭性的胃癌生物标志物(Liu et al.，2011;Song et al.，2012;Gorur et al.，2013;Li et al.，2013)。这些miRNAs在血清/血浆中表达情况与在胃癌组织中的表达情况是否一致，是否能以此作为胃癌的特异性标志物用于胃癌的诊断还有待进一步研究。

发明内容

解决的技术问题：本发明的目的在于针对血清/血浆miRNA表达与组织miRNA表达是否一致的问题，通过基因表达谱芯片在胃癌及相应的癌旁组织中筛选出差异表达的miRNAs，同时在胃癌患者血清/血浆及年龄性别匹配的正常对照血清/血浆中筛选出差异表达的miRNAs，然后找出组织和血清/血浆中共同上调或下调的miRNAs，作为胃癌患者血清/血浆miRNA标志物，为临床上胃癌患者的早期发现及早期治疗提供支持。

技术方案：检测胃癌的血清/血浆微小RNA标志物，所述生物标志物为：miR-148a、miR-142、miR-26a和miR-195中的一种或任意几种，所述miR-148a如SEQ ID NO:1所示，miR-142如SEQ ID NO:2所示，miR-26a如SEQ ID NO:3所示，miR-195如SEQ ID NO:4所示。