[发明专利]一种白血病融合基因荧光PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种白血病融合基因荧光PCR检测试剂盒。

背景技术

白血病（leukemia）是起源于造血系统的一类全身性恶性肿瘤，具有高度的异质性，但其共同的特点为骨髓中产生和积聚大量幼稚或异常的血细胞。与相对应的正常血细胞比较，这些异常的细胞具有不同的生物学特性，往往表现为增殖能力增高、分化障碍或凋亡减少，并且还可以表达一些细胞表面分子或分泌一些可溶性介质从而发挥其恶性特征。随着这些异常细胞的增多，可以引起骨髓正常造血功能和宿主免疫功能的抑制或衰竭，并且可以进入血液循环和侵犯其他任何组织和器官，最终导致贫血、感染、出血和器官浸润引起的各种临床症状和体征。临床出现不同程度的贫血、出血、发热及肝脾、淋巴结肿大，可危及生命。

白血病融合基因(fusion gene)，是白血病的分子生物学特异性标志。近年来，由于分子生物学技术的发展，对白血病细胞分子遗传学改变的了解也不断深入。迄今报道白血病涉及至少数十种融合基因.已经认识到大部分的白血病中存在着染色体结构畸变，包括缺失、重复、倒位、易位等，导致原癌基因及抑癌基因结构变异，原癌基因激活或抑癌基因失活，产生新的融合基因，编码融合蛋白。有些基因是调控细胞增殖、分化和凋亡的转录因子，当基因发生变异，直接影响了下游信号传递途径，导致细胞增殖能力增强、凋亡障碍，分化障碍等，产生白血病表型。

融合基因检测对白血病的诊断有着极其重要的意义。通过临床实践发现单纯细胞形态学分型，检测者的主观成分较大，相互间的符合率及正确率有一定限制。随着细胞和分子生物学技术的迅速发展及对白血病发病机制研究的不断深入，认识到白血病发病过程中的基因和表型变化对各类白血病的诊断与治疗具有重要意义，因此提出了白血病MICM分型。近两年白血病分子特征的研究取得了明显进展，尤其是对染色体易位形成融合基因，有一些已作为诊断不同类型白血病的分子生物学特异性标志和确定诊断的唯一依据。白血病融合基因可以通过逆转录PCR(RT-PCR)技术加以检出，有助于评价白血病的急性程度、克隆特性及分型，使白血病的诊断分型更加科学化和规范化。2007年卫生部颁布的《医疗机构临床检验项目目录》，其中有要求利用RT-PCR或real-time PCR技术的白血病融合基因检查，主要涉及6种融合基因的检查，包括BCR／ABL、PML／RARа、AML1／MPSI／EV11、DEK／CAN、AML1／MTG8、E2A／PBX1。RT-PCR可比传统的细胞学方法及临床症状出现早5～8个月，可检出1×10⁶个有核细胞中的一个白血病细胞，在白血病的早期诊断方面有着其它方法无可比拟的特异性和敏感性。

融合基因捡测对白血病治疗和预后判断也有着很重要的作用。细胞遗传学分型与疾病的预后关系密切，对于指导临床个性化治疗方案的选择和判断预后具有十分重要的意义。急性白血病有PML／RARа，CBFB／MYH11，AML1／ETO融合基因预后较好，化疗完全，缓解率高，可长期缓解或治愈，不主张早期做造血干细胞移植；而对于有MLL异常（融合基因中含MLL基因），或含AML（急性髓细胞白血病）中的MYC／IgH融合基因，或含ALL（急性淋巴细胞白血病）中的BCR／ABL融合基因，则病人对化疗反应差，复发率高，建议其有条件则积极行造血干细胞移植。有了融合基因的检测，初治时可指导科学合理地选择长期治疗方案，避免不必要的治疗不足或过度治疗。

融合基因检测常用的方法主要包括白血病细胞染色体核型分析、染色体荧光原位杂交(Fluorescent In Situ Hybridazation,FISH)技术和聚合酶链式反应技术（Polymerase Chain Reaction,PCR）。

染色体G显带核型分析技术的阳性率主要依赖于待检白血病细胞的增生率，常常受到检测技术条件和人为操作因素的影响，每份检测标本需要至少分析10～30个分裂中期细胞，而且由于样本中的细胞也并非都是均一的肿瘤细胞，因此当细胞量过少时则不能进行核型分析，同时某些复杂性染色体易位的辨认在技术上存在一定的困难。但核型分析技术在检测缺失和数目畸变等染色体异常方面具有优势，是检测ALL患者染色体异常必不可少的手段。