[发明专利]重组PAI-1抑制剂、包含其的组合物及其用于治疗和检测用途

说明书

本发明提供了一种重组PAI‑1抑制剂，所述PAI‑1抑制剂包含突变S195A的uPA水解酶结构域或tPA水解酶结构域，具有与PAI‑1的结合力。本发明还提供包含所述抑制剂的组合物及其在制备治疗药物中的应用以及制备检测PAI‑1的试剂中的应途。本发明的重组PAI‑1抑制剂是基于uPA或tPA的水解酶结构域进行改造以优化与PAI‑1的结合力而构建的，其中起码包含了S195A点突变体。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及重组PAI-1抑制剂、包含其的组合物及其医药用途。

背景技术

尿激酶系统（UrokinasePlasminogen Activator System，uPA system）由uPA、uPAR（uPA受体）以及两个特异性抑制因子PAI-1(Plasminogen Activator Inhibitor-1)和PAI-2组成，它参与调控着许多重要的生理过程如纤维蛋白溶解(Fibrinolysis)、细胞的粘附、侵染和转移等(1)。在该系统中，uPA属于丝氨酸蛋白酶（Serine Protease）家族，与细胞膜上的uPAR结合后，uPA能特异地催化无活性的纤维蛋白酶原（Plasminogen）转变成活性的纤维蛋白酶（Plasmin），后者能降解胞外基质中包括纤维蛋白在内的多种蛋白从而调控许多重要的生理病理过程。

PAI-1是丝氨酸蛋白酶抑制剂（Serpin）家族的重要成员，是uPA在体内的天然抑制剂，PAI-1是一种相对分子质量为50kD的单链糖蛋白，成熟的蛋白由379个氨基酸残基构成，等电点约4.5-5.5，含有23个氨基酸残基的信号肽。人类PAI-1基因定位于7号染色体q21.3-q22上，片断大小约12.3kb，包含9个外显子和8个内含子。其mRNA有2.4kb和3.2kb两种，二者都有活性功能。其三维结构由3个β-片层、9个α-螺旋和1个活性中心环（RCL）组成。其中，RCL是PAI-1发挥抑制活性的重要部位，它能插入到其靶酶纤溶酶原激活物（PA）的催化中心，其Arg346-Met347肽键被水解，并与uPA共价结合，RCL其他部分插入PAI-1内部的β-片层A中，导致靶酶催化中心构象变形而失活。PAI-1在体内有三种存在形态，即活性态、潜在活性态和底物态。体内PAI-1大多以潜在活性态形式存在，正常人血浆中活性态PAI-1仅占3%-5%。只有活性态的PAI-1对组织型纤溶酶原激活物（t-PA）和尿激酶型纤溶酶原激活物（u-PA）起抑制作用，从而使活性纤溶酶生成减少，导致纤维蛋白降解减少，给血栓形成创造有利条件。有活性的PAI-1是不稳定的，半衰期为30分钟。

在人体内，PAI-1的mRNA主要存在于血管内皮、单核细胞、血小板、脂肪、胎盘、胎儿肝、成纤维细胞、肺等器官、组织和细胞中。在血管内皮、脂肪、肝脏和脾脏中含量最为丰富，而脑及心脏含量较低。

作为uPA系统的重要组成，PAI-1不仅与血栓性疾病相关，而且与肿瘤的发生发展亦紧密联系(7、14)。