[发明专利]新型非侵入性血型基因检测试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测个体ABO血型的无创试剂盒，其特征在于利用非血生物学样本基因组DNA，通过PCR-RFLP法，检测个体ABO血型；其特征具体涉及从非血生物学样本中提取基因组DNA，对提取的基因组DNA中的ABO血型系统的三复等位单拷贝基因进行PCR扩增，并利用限制性内切酶酶切扩增片段，然后用琼脂糖凝胶电泳鉴定检测样本的ABO血型。本试剂盒包括： 

1.1基因组核酸抽提试剂； 

1.2PCR扩增试剂； 

1.3酶切分析试剂 。

2.根据权利要求1所述的非血生物学样本，其特征在于，包括但不仅限于含有人口腔上皮细胞的棉拭子或漱口水，人的毛发、指甲、精斑等非血液生物学样本。 

3.根据权利要求1所述的基因组DNA抽提方法，其特征在于，包括但不仅限于饱和氯化钠法、磁珠法、玻璃粉法、柱分离法等方法，较优为饱和氯化钠法。 

4.根据权利要求1所述的PCR扩增片段为利用引物扩增得到的，位于染色体9q34的ABO等位基因第6、第7外显子中含有核苷酸差异性的区段，较优为下述引物序列，以及与下述序列有80％及以上相似性的序列： 

SEQ NO.1：5'-CCTGTCCCTTTGTTCTCCAA-3’ 

SEQ NO.2：5’-AATGTCCACAGTCACTCGCC-3’ 

SEQ NO.3：5’-CGCATGGAGATGATCAGTG-3’ 

SEQ NO.4：5’-CACAAGTACTCGGGGGAGAG-3’ 。

5.根据权利要求1所述的的限制性内切酶为可特异性识别权利要求4中的扩增片段，并酶切的DNA限制性内切酶，较优为Kpn I及Alu I，以及与Kpn I及Alu I具有相同识别位点的限制性内切酶。 

6.一种用于非侵入性血型基因检测的方法，其特征在于，所述方法包括： 

(a)应用权利要求2-7任一所述的试剂盒，对检测受试者非血液样本进行预处理，基因组核酸的提取，PCR扩增，酶切和琼脂糖凝胶电泳鉴定； 

(b)分析血型基因型： 

根据权利要求5中的限制性内切酶，对权利要求4中扩增片段的酶切效果判定受试样品的血型基因型； 

若Kpn I能完全酶切染色体9q34的ABO等位基因第6外显子261位点，Alu I不能酶切ABO等位基因第7外显子703位点时，受试样品的血型基因型为OO，血型表型为O； 

若Kpn I不能酶切染色体9q34的ABO等位基因第6外显子261位点，Alu I不能酶切ABO等位基因第7外显子703位点时，受试样品的血型基因型为AA，血型表型为A； 

若Kpn I不能酶切染色体9q34的ABO等位基因第6外显子261位点，Alu I完全酶切ABO等位基因第7外显子703位点时，受试样品的血型基因型为BB，血型表型为B； 

若Kpn I不能酶切染色体9q34的ABO等位基因第6外显子261位点，Alu I部分酶切ABO等位基因第7外显子703位点时，受试样品的血型基因型为AB，血型表型为AB； 

若Kpn I部分酶切染色体9q34的ABO等位基因第6外显子261位点，Alu I不能酶切ABO等位基因第7外显子703位点时，受试样品的血型基因型为AO，血型表型为A； 

若Kpn I部分酶切染色体9q34的ABO等位基因第6外显子261位点，Alu I部分酶切ABO等位基因第7外显子703位点时，受试样品的血型基因型为BO，血型表型为B。