[发明专利]用于诱导多能干细胞的融合蛋白及其使用方法

权利要求书

1.一种融合蛋白，所述融合蛋白包含细胞全能性相关的基因编码的蛋白或其片段，以及与所述细胞全能性相关的基因编码的蛋白或其片段直接连接或通过连接序列连接的转录调控结构域或其具有转录调控活性的片段；

优选地，所述连接序列为GGGGS；

优选地，所述细胞全能性相关的基因编码的蛋白或其片段通过氨基端或羧基端与转录调控结构域或其具有转录调控活性的片段连接；优选地，所述细胞全能性相关的基因选自OCT4、SOX2、NANOG、SOX1、SOX3、SOX15、SOX18、STAT3、SMAD1、Sal4、Nr5a2、Daxl、Esrrb、Utf1、MyoD、CEBPα、Pax5，Pdx1、Ngn3、MafA、Ascl1、Brn2、Myt1l、Gata4、Mef2c和Tbx5中的一种或多种；更优选地，所述细胞全能性相关的基因选自OCT4、SOX2、NANOG、MyoD、CEBPα、Pax5、Pdx1、Ngn3、MafA、Ascl1、Brn2、Gata4、Mef2c和Tbx5中的一种或多种；进一步优选地，所述细胞全能性相关的基因选自OCT4、SOX2和NANOG中的一种或多种，例如一种、两种或三种；

优选地，所述转录调控结构域为哺乳动物YAP蛋白的转录激活结构域或其具有转录调控活性的片段；更优选地，所述转录调控结构域选自小鼠、猪、羊、牛或人的YAP蛋白的转录激活结构域或其具有转录调控活性的片段；进一步优选地，所述转录调控结构域选自小鼠的YAP蛋白的转录激活结构域或其具有转录调控活性的片段；再进一步优选地，所述转录调控结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示。

2.如权利要求1所述的融合蛋白，其中，所述融合蛋白选自以下的一种或多种：OCT4蛋白与YAP蛋白的转录激活结构域融合形成的融合蛋白；SOX2蛋白与YAP蛋白的转录激活结构域融合形成的融合蛋白；NANOG蛋白与YAP蛋白的转录激活结构域融合形成的融合蛋白；、MyoD蛋白与YAP蛋白的转录激活结构域融合形成的融合蛋白；CEBPα蛋白与YAP蛋白的转录激活结构域融合形成的融合蛋白；Pax5蛋白与YAP蛋白的转录激活结构域融合形成的融合蛋白；Pdx1蛋白与YAP蛋白的转录激活结构域融合形成的融合蛋白；Ngn3蛋白与YAP蛋白的转录激活结构域融合形成的融合蛋白；MafA蛋白与YAP蛋白的转录激活结构域融合形成的融合蛋白；Ascl1蛋白与YAP蛋白的转录激活结构域融合形成的融合蛋白；Brn2蛋白与YAP蛋白的转录激活结构域融合形成的融合蛋白；Gata4蛋白与YAP蛋白的转录激活结构域融合形成的融合蛋白；Mef2c蛋白与YAP蛋白的转录激活结构域融合形成的融合蛋白；Tbx5蛋白与YAP蛋白的转录激活结构域融合形成的融合蛋白；

优选地，所述融合蛋白选自SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：38-48所示的氨基酸序列中的一种或多种。

3.一种核苷酸序列，所述核苷酸序列编码如权利要求1或2所述的融合蛋白；

优选地，编码所述转录调控结构域的核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示；

优选地，所述核苷酸序列选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：49-59所示的核苷酸序列中的一种或多种。

4.一种表达载体，所述表达载体表达如权利要求1或2所述的融合蛋白；

优选地，所述载体为逆转录病毒载体；

更优选地，所述进行逆转录病毒包装的细胞为293T细胞。