[发明专利]一种检测毛竹纳米微晶纤维素生物相容性的方法

权利要求书

1.一种检测毛竹纳米微晶纤维素生物相容性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将毛竹纳米微晶纤维素配制成浓度0.04 wt%溶液，进行高压灭菌处理，得到经预处理的毛竹纳米微晶纤维素溶液；

2）在无菌环境下，将检测细胞在培养基中按传代培养方法消化成单细胞悬浊液，进行细胞计数，以5×10³个/孔向96孔板中加入检测细胞，同时量取步骤1）中得到的经预处理的毛竹纳米微晶纤维素溶液分别加入96孔板，保证每孔溶液总量200 μL，获得毛竹纳米微晶纤维素-检测细胞混合培养液，放入细胞培养箱中进行培养；

3）分别在1、3、5、7天吸取96孔板中的毛竹纳米微晶纤维素-检测细胞混合培养液，用磷酸缓冲溶液（Phosphate buffer solution, PBS）清洗数次，加入细胞增殖与活性检测试剂（Cell Counting Kit, CCK-8）和培养基在培养箱中培养2-6 h，吸取100 μL上清液加入96孔板中, 在450 nm波长采用酶标仪检测其光密度值（Optical density, OD）；

4）同时将步骤2）中得到的毛竹纳米微晶纤维素-检测细胞混合培养液与含有细胞膜绿色荧光探针染料（DiO）的培养基在细胞培养箱中培养10~20 min，吸出培养基并用PBS溶液清洗去除未结合染料，加入1 mL胰酶，制成单细胞悬液，放入细胞培养箱中进行培养，分别在1、3、5、7天利用荧光显微镜观察细胞的增殖情况。

2.根据权利要求1所述的一种检测毛竹纳米微晶纤维素生物相容性的方法，其特征在于：所述的毛竹纳米微晶纤维素，是由硫酸水解或纤维素酶水解毛竹纤维制备得到的。

3.根据权利要求1所述的一种检测毛竹纳米微晶纤维素生物相容性的方法，其特征在于：所述的PBS溶液浓度为 0.01~0.05 mol/L；CCK-8试剂与培养基质量比为1:10~50；Dio染料与培养基质量比为1:100~300。

4.根据权利要求1所述的一种检测毛竹纳米微晶纤维素生物相容性的方法，其特征在于：所述的检测细胞为小鼠成纤维细胞（L929）和人骨肉瘤细胞（MG63）中的一种，其中L929细胞采用MEM培养基进行培养，MG63细胞采用DMEM培养基进行培养。