[发明专利]TGEV、PEDV二联活疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了一种猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒二联活疫苗及其制备方法。本发明采用自行分离、致弱、保存的一株猪传染性胃肠炎病毒弱毒HB08株和一株猪流行性腹泻病毒弱毒ZJ08株，分别在ST细胞和Vero E6细胞上进行病毒增殖，再向检验合格的病毒液中加入冻干保护剂进行配苗、冷冻干燥。该二联活疫苗能够有效预防目前临床上流行的猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻两种疾病。

技术领域

本发明属于兽用生物制品领域，具体涉及猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒二联活疫苗及其制备方法。

背景技术

猪传染性胃肠炎(porcine transmissible gastroenteritis,TGE)是引起猪腹泻的一种重要接触性病毒性肠道传染病，发病快，对2周龄以内仔猪有高度致死率，几乎能达到100％。5周龄以上的猪病死率较低，但是由于腹泻的影响，生长慢，饲料报酬低，造成严重的经济损失。该病1946年由Doyle等人确定了病原。从60年代末起，我国许多省市有该病流行。

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhoea,PED)是引起猪腹泻的一种高度急性、接触性病毒性肠道传染病，以水样腹泻、呕吐、脱水和食欲下降为特征。该病最早于上世纪70年代发生在英国和比利时，1973年先后在我国上海、辽宁、吉林等地分离到PEDV。PEDV可在猪群中持续存在，各种年龄猪均易感。哺乳仔猪、架子猪和育肥猪的发病率可达100％，尤以哺乳仔猪严重，病死率达100％。目前，还没有特效药物抵抗猪流行性腹泻病毒，由于该病发病急，流行快，猪群一旦感染，就会给养殖户带来巨大的经济损失。

猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒均属冠状病毒科成员，二者引起的临床症状疾病的流行特点均及其相似，但是却没有免疫学和血清学相互交叉反应。猪群可单一或混合感染这两种病毒。为防控猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻，国内外专家做了很多研究，但目前仍无特效药物。

免疫接种是防制该病的重要手段，国内外有使用疫苗的报道，但是效果不尽人意。尤其近几年，原来的疫苗对猪腹泻病的保护越来越差，临床上不断出现腹泻病例，这除了加强饲养管理外，尽快研制出一种能够有效防制猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻的疫苗已成当务之急。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供由本发明人自行分离、致弱、保存的一株猪传染性胃肠炎病毒弱毒HB08株和一株猪流行性腹泻病毒弱毒ZJ08株，利用两毒株制备一种猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联活疫苗，用于防制目前流行的猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻两种疾病。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术途径来实现的：

猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒二联活疫苗，其含有猪传染性胃肠炎病毒弱毒株HB08株和猪流行性腹泻病毒弱毒株ZJ08株，所述的猪传染性胃肠炎病毒HB08株的保藏号为CGMCC No.7807，病毒含量为10^6.5～10^8.0TCID₅₀/mL，所述的猪流行性腹泻病毒ZJ08株的保藏号为CGMCC No.7806，病毒含量为10^6.5～10^7.5TCID₅₀/mL。

在本发明的实施方案中，所述二联活疫苗还含有冻干保护剂。

其中，所述的冻干保护剂优选为蔗糖明胶保护剂，其中明胶浓度2％～6％，蔗糖浓度10％～35％。

从河北省某猪场送检猪传染性胃肠炎抗原阳性的病料中分离到TGEV。将分离到的猪传染性胃肠炎病毒在ST细胞上连续传代，从第125代开始ORF3基因连同前面的间隔区序列出现81个核苷酸的缺失，至165代稳定缺失81个核苷酸。从第125代开始，TGEV对仔猪失去致病性；将TGEV 145代种毒在猪体连传5代，毒力依然很稳定，没有任何返强现象