[发明专利]一株赤霉菌及其在制备芦丁和槲皮素中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株赤霉菌及其在制备芦丁和槲皮素中的应用。

背景技术

芦丁,又称为芸香苷，是槲皮素的主要存在形式之一，是一类来源很广的黄酮类化合物，主要存在于豆科植物槐(Sophora japonica L.)的花蕾(槐米)、果实(槐角),芸香科植物芸香(Ruta graveolenslens L.)全草，金丝桃科植物红旱莲(Hypericum ascyron L.)全草及蓼科植物荞麦(Fagopyrum esculentum Moench)的籽苗中。

芦丁具有广泛的利用价值，主要体现在其作为治疗药物以及保健品上。芦丁具有维生素P样作用，能降低毛细血管通透性和脆性，促进细胞增生和防止血细胞凝聚，以及抗炎、抗过敏、利尿、解痉、镇咳、降血脂等方面的作用。而国内外医药行业以芦丁作为原料，开发了多种药物，如芦丁片、维脑路通(羟乙芦丁)、芦丁镁铬盐、多维葡萄糖羟丁芦丁、槲皮素等心血管药物。此外，芦丁还可作为抗氧化剂和天然食用色素。

目前，我国芦丁生产主要以槐米为原料进行提取，而槐米因资源不足，不能充分满足市场需求，因此探索芦丁的新来源以缓解供应紧张，具有十分重要的意义。传统的芦丁提取法主要有(热)碱提取酸沉淀法、大孔吸附树脂纯化法、超声波辐射提取多次重结晶法、连续回流提取法等，这些传统方法虽然可以成功提取芦丁，但是都存在着各种各样的弊端，如产率低、水解副产物较多、工艺复杂、成本较高等。

发明内容

本发明的目的是提供一株赤霉菌及其在制备芦丁和槲皮素中的应用。

本发明提供的赤霉菌(Gibberolla intermedia)TG1，简称赤霉菌TG1，已于2013年12月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所），保藏登记号为CGMCC NO.8572。

本发明还保护赤霉菌TG1在制备芦丁和/或槲皮素中的应用。

本发明还保护一种制备芦丁和/或槲皮素的方法，包括如下步骤：发酵培养赤霉菌TG1，得到芦丁和/或槲皮素。

所述发酵培养采用的培养基具体可为马铃薯葡萄糖培养基。

所述发酵培养的条件具体可为：26-30℃、100-150rpm振荡培养5-9天。所述发酵培养的条件更加具体可为：28℃、120rpm振荡培养7天。

所述方法中还可包括将发酵液进行萃取的步骤。所述萃取采用的萃取剂具体可为氯仿。

本发明提供的内生赤霉菌可通过发酵制备芦丁和槲皮素，操作简单、成本低廉、生产周期短，具有工业化规模生产的应用潜力。本发明为芦丁和槲皮素的资源开发提供了新途径，并且对保护植物生态多样性具有重要意义。

附图说明

图1为赤霉菌TG1的菌落形态。

图2为显微镜下观察赤霉菌TG1的照片。

图3为芦丁标准品和槲皮素标准品的高效液相色谱图。

图4为粗提物的高效液相色谱图。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。芦丁标准品（结构式见式Ⅰ）和槲皮素标准品（结构式见式Ⅱ）均购自中国药品生物制品检定所。实施例中用抽滤器分离时采用杭州特种纸业有限公司的定性滤纸（中速：102）。

实施例1、赤霉菌TG1的分离和鉴定

一、菌株的分离

将自甘肃省兰州市兴隆山（海拔2300m）采集的桃儿七属（Sinopodophyllum）植物桃儿七（Sinopodophyllum hexandrum(Royle)Ying）的根及根状茎分别用自来水洗净，在超净工作台中用75%（体积百分含量）乙醇水溶液处理5min，然后无菌水冲洗3-5次；而后再用2.5%（质量百分含量）次氯酸钠水溶液处理10min，再无菌水冲洗3-5次；用灭菌的镊子和刀片将桃儿七的根的外皮剥去，再切成0.5cm×0.5cm大小的小片种植于PDA固体培养基上，28℃培养3-7天；同时将同样灭菌处理过的桃儿七的根不做剥皮及切割，在PDA培养基上滚动一周后，同条件培养作为对照观察。