[发明专利]一种中药制剂护肝滴丸的质量检测方法

权利要求书

1.一种中药制剂护肝滴丸的质量检测方法，其特征在于，所述的质量检测方法，按以下步骤进行：一、以柴胡皂苷a为对照品，采用高效液相色谱法测定护肝滴丸处方中是否含有柴胡成分；二、以五味子醇甲为对照品，采用高效液相色谱法测定护肝滴丸中是否含有五味子成分；三、以五味子乙素为对照，采用薄层色谱法鉴别护肝滴丸中是否含有五味子成分；四、以猪去氧胆酸为对照品，采用薄层色谱法鉴别护肝滴丸中是否含有猪胆粉成分；五、以绿原酸为对照品，采用薄层色法鉴别护肝滴丸中是否含有茵陈成分，即完成护肝滴丸的质量检测。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述护肝滴丸的有效成份含量的测定步骤如下：

（1）检测柴胡成分

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B；检测过程中在0-50分钟期间，流动相A:B以（25→90：75→10）进行梯度洗脱，在50-55分钟期间，以流动相A:B以（90:10）进行洗脱；检测波长为210nm；理论板数按柴胡皂苷a峰计算不低于10000；

对照品溶液的制备：取柴胡皂苷a对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含柴胡皂苷a0.3-0.5mg的溶液，摇匀，即得；

供试品溶液的制备：取护肝滴丸10-100丸，精密称定，水浴熔融后搅拌均匀，放冷，精密称定0.2-1.0g，加水饱和的正丁醇10-50ml使溶解，转移至分液漏斗中，用氨试液10-30ml分次洗涤容器，加入分液漏斗中，摇匀，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醚10ml分次洗涤，乙醚液离心，弃去乙醚溶液，不溶物及残渣加甲醇使溶解，定量转移至25ml量瓶中，加甲醇适量洗涤容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；用0.45μm的微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液；

阴性样品溶液的制备：按《中华人民共和国药典》一部护肝片的处方配比取除柴胡以外的其他药材，按照护肝滴丸的制法制备成滴丸，按照“供试品溶液的制备”方法制备，作为阴性样品溶液；

测定法：分别吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

合格标准：每丸含柴胡以柴胡皂苷a（C₄₂H₆₈O₁₃）计，不得少于0.05mg；

（2）检测五味子成分

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填充剂；体积比为63:37的甲醇:水为流动相；检测波长为250nm；流速为0.8ml/min；柱温25℃；理论板数按五味子醇甲峰计算不低于2000；

对照品溶液的制备：取五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1-0.5mg的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取护肝滴丸10-100丸，精密称定，水浴熔融后搅拌均匀，放冷，精密称定0.2-0.5g，加适量硅藻土，分散均匀，加环己烷回流提取1-3次，每次20-50ml、30分钟，滤过，用环己烷适量洗涤容器和滤器，洗液与滤液合并，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至10ml量瓶中，用甲醇适量洗涤容器，洗液并入量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液；

阴性样品溶液的制备：按《中华人民共和国药典》一部护肝片处方的配比取除五味子以外的其他药材，按照护肝滴丸的制法制备成滴丸，按照“供试品溶液的制备”方法制备，作为阴性样品溶液；

测定法：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；

合格标准：每丸含五味子以五味子醇甲(C₂₄H₃₂O₇)计，不得少于0.038mg。

3.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述的检测方法中还包括护肝滴丸的鉴别方法，步骤如下：

（1）五味子的鉴别

供试品溶液的制备：取护肝滴丸20-60丸，加甲醇20ml，超声处理20分钟，冷冻2小时，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加环己烷10-50ml，超声20-40分钟，滤过，药渣备用，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取五味子乙素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性供试品溶液的制备：按《中华人民共和国药典》一部护肝片处方的配比称取除五味子以外的其他药材，按照护肝滴丸的制备方法制成滴丸，按“供试品溶液的制备”方法制备成阴性供试品溶液；

取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性供试品溶液各2-5μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以体积比为9:1的甲苯和醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm的紫外光灯下检视；

鉴别护肝滴丸处方中含有五味子的条件为：置254nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰，表明供试品中含有五味子成分；

（2）猪胆粉的鉴别

供试品溶液的制备：取鉴别步骤（1）中获得的环己烷提取后的药渣，挥尽环己烷，加质量分数为10%氢氧化钠溶液10ml，120℃加热4-6小时，放冷后用盐酸调节pH值2-3，移至离心管中，离心，弃去上清液，沉淀加甲苯5ml充分搅拌，离心，分取上清液，沉淀再同法操作2次，合并上清液，置水浴上蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：另取猪去氧胆酸，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性供试品溶液的制备：按《中华人民共和国药典》一部护肝片处方的配比称取除猪胆粉以外的其他药材，按照护肝滴丸的制备方法制成滴丸，按“供试品溶液的制备”方法制备成阴性供试品溶液；

吸取上述供试品溶液5-10μl，对照品溶液3-5μl，阴性供试品溶液5-10μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8-12:5:5:3:1的异辛烷、乙醚、冰醋酸、正丁醇和水的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量分数为10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；

鉴别护肝滴丸处方中含有猪胆粉的条件为：置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰；，表明供试品中含有猪胆粉成分；

（3）茵陈的鉴别

供试品溶液的制备：取护肝滴丸10-30丸，加丙酮20-40ml，超声处理3-40分钟，冷藏12小时，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣用水5-6ml分两次转移至预先处理的D101型大孔树脂柱（柱长15cm，内径1cm）上，用水50ml洗脱，弃去水洗液，再用体积分数为20%的乙醇40-60ml洗脱，流速为每分钟0.5ml，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣用甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；

对照品溶液的制备：取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；

阴性供试品溶液的制备：按《中华人民共和国药典》一部护肝片处方的配比称取除茵陈以外的其他药材，按照护肝滴丸的制备方法制成滴丸，按“供试品溶液的制备”方法制备成阴性供试品溶液；

吸取上述对照品溶液1-3μl、供试品溶液2-5μl与阴性供试品溶液2-5μl分别点于同一聚酰胺薄膜（5cm×7cm）上，以冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干；

鉴别护肝滴丸处方中含有茵陈的条件为：置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰；，表明供试品中含有茵陈成分。