[发明专利]一种酶解法提取分离肝素钠的方法

说明书

技术领域

本发明涉及有机高分子化合物的制备方法，特别是一种酶解法提取分离肝素钠的方法。

背景技术

肝素钠是由猪或牛的肠粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属粘多糖类物质，为白色或类白色粉末，无臭无味，有吸湿性，易溶于水，不溶于乙醇、乙醚、丙酮和苯等有机溶剂。

目前肝素是世界上最有效和临床用量最大的抗凝血药物，主要应用于心脑血管疾病和血液透析治疗，其中在血液透析治疗中是唯一有效的特效药物。临床应用及研究显示，肝素除具有抗凝血作用外，还具有其他多种生物活性和临床用途，包括降血脂作用、抗中膜平滑肌细胞增生、促进纤维蛋白溶解等作用。

现有传统的肝素钠生产工艺是酶解提取，盐析精制。即通过胰酶胃酶在适宜的pH和温度条件下酶解提取原料猪小肠中的肝素，获得肝素粗品原液。肝素粗品原液在一定温度下，由于盐溶液的加入，杂蛋白与肝素的连接键不断打开，同时钠离子与肝素反应结合生成肝素钠，产品得以精制纯化。该工艺简单，方便，成本低。但其主要缺点在于肝素回收率低，含有大量肝素的盐解液回收利用率低，产生了大量的废料。

发明内容

本发明的目的在于提供一种回收率高，废料少的酶解法提取分离肝素钠的方法。

实现本发明目的的技术解决方案为：

一种酶解法提取分离肝素钠的方法，包括以下步骤：

步骤一、原料处理；将猪小肠用清水洗净，绞碎成糜状，搅拌加入等体积的水，制得小肠原液；

步骤二、活化生物酶；取生物酶原液，用NaOH溶液调pH值至8.0～9.0，静置1～2小时，收集得到生物酶液，备用；

步骤三、酶解；将30mL生物酶液和10～15L小肠原液倒入反应釜中，用NaOH溶液调节pH值至8.0～9.0，加热至45～55℃，再加入胶原蛋白酶10～20mL，保温2～4小时，继续加热至85～90℃，保温4小时，过滤收集反应液，备用；

步骤四、干燥；将反应液干燥制得肝素钠粗品。

其中，步骤一所述原料处理过程中可加入浓度为0.1wt%的防腐剂1～2ml。

其中，步骤一所述原料处理过程中猪小肠来源于新鲜或冷冻猪小肠。

其中，步骤二所述生物酶原液直接取自碾碎的猪胰脏或者用市售的胃酶和胰酶，按照1:2的质量比例配制。

其中，步骤三所述酶解过程加热至45～55℃时，优选加入胶原蛋白酶15mL，保温3小时。

其中，步骤四可采用冷冻干燥或真空干燥的方法制得肝素钠粗品。

本发明与现有技术相比，其显著优点：酶解过程中加入胶原蛋白酶，采用分阶段加热的方法，保证肝素与杂蛋白连接键的充分裂解，提高肝素回收率；反应过程中没有用到乙醇、盐、树脂洗脱液等传统工艺常用的溶剂，所得中间反应液均可回收利用，将“绿色化学”的思想运用于整个提取工艺，尽量少使用有机溶剂，使肝素钠的提取工艺简洁明晰，易于工业化。

具体实施方式

实施例一

步骤一：原料处理。将8kg新鲜猪小肠用清水洗净，绞碎成糜状，并在充分搅拌下，加入等体积的水混合，再加入1～2ml浓度为0.1wt%的防腐剂混合均匀，制得小肠原液。

步骤二：活化生物酶。取猪的胰脏，越新鲜越好，碾碎，加入NaOH溶液，调pH值至8.0～9.0，静置1～2小时。

步骤三：酶解。将30mL生物酶液和约15L小肠原液倒入反应釜中加热，加入NaOH溶液，调节pH值至8.5，加热至50℃，再加入胶原蛋白酶15mL，保温3小时，继续加热至85～90℃，保温4小时，过滤收集反应液。

步骤四：干燥。将反应液冷冻干燥制得肝素钠粗品5.6kg。

按照《中国药典》方法测定肝素钠效价，可得肝素钠粗品回收率达70.2%。

实施例二

步骤一：原料处理。将8kg新鲜猪小肠用清水洗净，绞碎成糜状，并在充分搅拌下，加入等体积的水混合，制得小肠原液。

步骤二：活化生物酶。用市售的胃酶和胰酶，按照1:2的质量比例进行配制，制得30mL生物酶原液。加入NaOH溶液，调pH值至8.0～9.0，静置1～2小时，收集得到生物酶液。

步骤三：酶解。将30mL生物酶液和约12L小肠原液倒入反应釜中加热，加入NaOH溶液，调节pH值为8.5，加热至50℃，再加入胶原蛋白酶15mL，保温2小时，继续加热至85～90℃，保温4小时，过滤收集反应液。

步骤四：干燥。将反应液真空干燥制得肝素钠粗品4.9kg。

按照《中国药典》方法测定肝素钠效价，可得肝素钠粗品回收率达66.9%。