[发明专利]一种多肽、制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种多肽，同时还涉及该多肽的制备方法及其应用。

背景技术

过敏性鼻炎哮喘综合症是指同时发生的临床或亚临床的上和下呼吸道的过敏性症状，两者往往同时并存。过敏性鼻炎哮喘症的上、下呼吸道的免疫学和病理学改变分别是发生在鼻黏膜和支气管黏膜的过敏性炎症，即炎症细胞渗出，嗜酸性粒细胞、肥大/嗜碱细胞增多。目前对这种疾病的治疗尚无特效药物，如应用吸入性皮质激素或β-2兴奋剂等对哮喘的治疗也只能是缓解症状，并不能治愈或使病程逆转。

类胰蛋白酶是主要由肥大细胞分泌的一种炎症介质，在过敏反应炎症发生过程中起到一定的促进作用。肥大细胞能够分泌α、β和γ类胰蛋白酶，其中β-类胰蛋白酶是肥大细胞脱颗粒过程中释放的主要同工酶。β-类胰蛋白酶能够促进人类肥大细胞脱颗粒，加剧组胺型支气管收缩，增加嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的迁移以及肺肌细胞和呼吸道平滑肌细胞的增殖。研究证明类胰蛋白酶抑制剂可以降低小鼠哮喘模型中炎症的发生率，可以减少嗜酸性粒细胞的浸润和支气管的反应性。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于治疗过敏性鼻炎哮喘综合症的多肽。

本发明的第二个目的是提供一种多肽的制备方法。

本发明的第三个目的是提供一种多肽在制备治疗过敏性鼻炎的药物方面的应用。

本发明的第四个目的是提供一种多肽在制备治疗哮喘的药物方面的应用。

本发明的第五个目的是提供一种多肽在制备治疗过敏性鼻炎哮喘综合症的药物方面的应用。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：一种多肽，其氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示。具体为：亮氨酸-缬氨酸-精氨酸-甘氨酸-半胱氨酸-色氨酸-苏氨酸-赖氨酸-丝氨酸-酪氨酸-脯氨酸-脯氨酸-赖氨酸-脯氨酸-半胱氨酸-苯丙氨酸-缬氨酸-精氨酸多肽，记为亮-精多肽。

上述多肽的组织提取制备方法（动物组织提取法），包括下列步骤：

1）取北豹蛙皮肤，剁碎后置于4℃的酸化乙醇中消化12h，后离心分离，取上清液旋转浓缩，冷冻干燥，得冻干物；

2）体积排阻色谱法分离：将步骤1）所得冻干物置于浓度为2mol/L的乙酸中处理后，装入葡聚糖凝胶G50色谱柱中，以浓度为2mol/L的乙酸平衡，柱子流速10mL/h，收集色谱峰60组分，冻干，即得所述多肽。

所述酸化乙醇是由乙醇与浓度为0.7mol/L的盐酸按体积比为3:1的比例配制而成的；所述酸化乙醇的用量为：每g皮肤组织加入8mL酸化乙醇。

步骤1）中所述离心分离的温度为4℃，离心力为3000g，时间为30min。

上述多肽的化学合成制备方法（人工合成法），包括下列步骤：

1）以2-(1H-苯并三偶氮L-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸酯为缩合剂，采用王树脂Fmoc-氨基酸-王树脂固相合成法逐一耦合每一个保护氨基酸，合成得到全保护的肽链树脂；

2）用切割试剂对侧链全保护的肽链树脂进行切割，将肽链从树脂上裂解下来并去除侧链保护基团，得多肽粗品；

3）将多肽粗品溶于二甲基亚砜与水按照体积比为2:8的比例配制而成的混合物中，制成多肽浓度为0.01mmol/L的粗品溶液；

4）将步骤3）所得粗品溶液采用制备型HPLC进行纯化，用电喷射质谱检测纯化的目的多肽，即得。

步骤2）中所述切割试剂为三氟乙酸、苯酚、水、三异丙基硅烷按照体积比为88:5:5:2的比例配制而成的混合物。

步骤4）中所述纯化的色谱条件为：色谱柱为Nucleosil C-18，250×20mm；流动相A为三氟乙酸/水=0.1:99.9（v/v），流动相B为三氟乙酸/乙腈/水=0.1:80.0:19.9（v/v/v）；线性梯度10%～70%B/70min，0.68%乙腈/min。

上述多肽在制备治疗过敏性鼻炎的药物方面的应用。

上述多肽在制备治疗哮喘的药物方面的应用。

上述多肽在制备治疗过敏性鼻炎哮喘综合症的药物方面的应用。

将所述多肽用灭菌双蒸水或PBS缓冲液稀释制成浓度为0.1～5mg/mL的混合物，使用时，将该混合物直接滴入鼻腔或雾化后吸入鼻腔。用药周期为每天一次，连续7天。