[发明专利]一种人源产肠毒素大肠杆菌鞭毛蛋白2FliC融合蛋白及其应用

权利要求书

1.一种含有人源产肠毒素大肠杆菌 fliC基因的重组质粒pRSET-B-2fliC，其序列为SEQ ID NO.1所示。

2.含有权利要求1所述重组质粒的基因工程菌。

3.权利要求2所述基因工程菌表达的融合蛋白，其序列为SEQ ID NO. 2所示。

4.利用权利要求3所述的融合蛋白制备的卵黄抗体。

5.权利要求4所述的卵黄抗体在体外抑制大肠杆菌粘附中的应用。

6.权利要求4所述的卵黄抗体在制备抗人源肠毒素大肠杆菌免疫疫苗中的应用。

7.权利要求3所述的融合蛋白在制备抗腹泻蛋类中的应用。

8.权利要求3所述融合蛋白的复性方法，其步骤如下：

接种菌株至300mL培养基中，诱导表达，从培养液中收集菌体，再重悬于预冷的30ml的BufferA中，压力破碎仪破碎3-5次，离心保留沉淀，30ml BufferA重悬沉淀，缓慢加入10%SKL，不停搅拌至沉淀溶解，溶液澄清，4℃静置2h，继续加入终浓度0.2%的PEG4000、600μL氧化型谷胱甘肽与还原型谷胱甘肽，4℃静置2h，10000rpm离心15min弃去未溶解的菌体杂质，即得；

所述的BufferA的配方：Tris 6.055g，EDTA 0.186g，NaCl 2.925g，甘油50mL，加入ddH₂O定容至1L，使用前现加入DTT至终浓度0.5mmol/L；

所述的菌株为含有重组质粒pRSET-B-2fliC的基因工程菌，pRSET-B-2fliC序列为SEQ ID NO.1所示。