[发明专利]花叶山菅兰的组织培养方法

权利要求书

1.花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，该方法采用以下步骤：

(1)取花叶山菅兰从基部萌发的小芽，冲洗干净后依次用75v／v％的乙醇浸泡30s、1wt‰升汞浸泡15min、无菌水冲洗5-6次，吸干表面水份后取小芽基部切成1cm长，接种于小芽诱导培养基上，该培养基上的营养成分为MS+6-BA1.0-5.0mg／L+NAA0.1-0.5mg／L，控制培养温度为24-30℃，光照为70-100μmol／ms，进行芽诱导培养；

(2)小芽接种于小芽诱导培养基上4周后开始膨大并出现黄绿色突起，2周后可见明显的愈伤组织，继续培养1个月，切下带芽愈伤组织分别放入增殖培养基中，该培养基的营养成分为MS+6-BA1.0-3.0mg／L-+NAA0.1-0.3mg／L，控制培养温度为24-30℃，光照为70-100μmol／ms，进行增殖培养；

(3)诱导出的丛生芽每丛有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，分成小丛或单芽后放入壮苗培养基中，该培养基的营养成分为MS+6-BA0.5-2.0mg／L+NAA0.1-0.2mg／L上，控制培养温度为24-30℃，光照为70-100μmol／ms，进行壮苗培养，不定芽迅速伸长，30天后长到2-3cm；

(4)取2-3cm的小植株转接入生根培养基中诱导生根，该培养基的营养成分为MS+NAA0.1-1.0mg／L，控制培养温度为24-30℃，光照为70-100μmol／ms，20天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后长至2-3cm；

(5)生根培养30天，根系长至1-2cm，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外。

2.根据权利要求1所述的花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，所述的小芽诱导培养基的营养成分优选MS+6-BA1.0mg／L+NAA0.1mg／L，MS+6-BA3.0mg／L+NAA0.3mg／L或MS+6-BA5.0mg／L+NAA0.5mg／L。

3.根据权利要求2所述的花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，所述的小芽诱导培养基的营养成分优选MS+6-BA3.0mg／L+NAA0.3mg／L。

4.根据权利要求1所述的花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，所述的增殖培养基的营养成分优选MS+6-BA1mg／L-+NAA0.1mg／L，MS+6-BA2mg／L+NAA0.2mg／L或MS+6-BA3mg／L+NAA0.3mg／L。

5.根据权利要求4所述的花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，所述的增殖培养基的营养成分优选MS+6-BA2mg／L+NAA0.2mg／L。

6.根据权利要求1所述的花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，所述的壮苗培养基的营养成分优选MS+6-BA0.5mg／L+NAA0.1mg／L，MS+6-BA1.0mg／L+NAA0.1mg／L或MS+6-BA2mg／L+NAA0.2mg／L。

7.根据权利要求6所述的花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，所述的壮苗培养基的营养成分优选MS+6-BA1.0mg／L+NAA0.1mg／L。

8.根据权利要求1所述的花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，所述的生根培养基的营养成分优选MS+NAA0.1mg／L，MS+NAA0.5mg／L或MS+NAA1mg／L。

9.根据权利要求8所述的花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，所述的生根培养基的营养成分优选MS+NAA0.5mg／L。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，小芽诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基还包括基本成分，该基本成分包括蔗糖30g／L、琼脂6g／L，上述培养基的pH值控制在5.8。