[发明专利]一种橙皮苷类免疫亲和柱的制备及其应用

权利要求书

1.一种橙皮苷类免疫亲和柱在检测橙皮苷和柚皮芸香苷中的应用，

所述橙皮苷类免疫亲和柱包含有载体和橙皮苷类抗体；

所述的载体是琼脂糖凝胶，所述的琼脂糖凝胶包含但不限于溴化氰活化的琼脂糖凝胶、交联的琼脂糖凝胶、聚丙烯酸琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶以及纤维素；

所述的橙皮苷类抗体包括单克隆IgG抗体或多克隆抗体；

所述橙皮苷类免疫亲和柱制备方法为:

1)载体活化

取2％的预溶胀的琼脂糖凝胶sepharose4B，用20倍体积的蒸馏水充分冲洗，洗去残存的乙醇，用漏斗过滤掉水分，称取滤去水分后的湿凝胶5克，加入7.5毫升0.8M的NaOH溶液，30％的环氧氯丙烷2毫升，2mg/ml的硼氢化钠5毫升，在25℃下摇床反应8小时，反应后，用大量的蒸馏水洗涤，去除凝胶中混杂的环氧氯丙烷；

2)橙皮苷类抗体与琼脂糖凝胶载体连接

将抗体连接于琼脂糖凝胶上，将橙皮苷类抗体溶于20mM pH7.4的PBS中，终浓度2mg/ml，将抗体加入用20mM pH7.4的PBS缓冲液洗涤过的凝胶中，室温结合30分钟，结合后的载体用PBS洗涤，连接有抗体的载体命名为抗体—sepharose；

3)载体交联

将抗体—sepharose用0.1M pH9.0的硼酸缓冲液洗涤3次，然后加入0.1M pH9.0的硼酸缓冲液，在缓冲液中加入交联剂庚二亚氨酸二甲酯至终浓度20mM，室温交联1小时，加入50mM pH9.0的乙醇胺终止反应，并用50mM的乙醇胺封闭10分钟，交联后的抗体—sepharose载体用20mM pH7.4的PBS洗涤3次；

4)装柱

将交联后的抗体—sepharose载体根据需要装入层析柱中，可根据需要制备不同容量的橙皮苷类免疫亲和柱，放于4℃保存。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，包含但不限于中药中橙皮苷类成分的分离纯化。