[发明专利]一种海洋链霉菌及利用其制备Enterocin的方法以及该菌的应用

说明书

技术领域：

本发明属于工业微生物领域，具体涉及一种海洋链霉菌及利用其制备Enterocin的方法以及该菌的应用。

背景技术：

肠道菌素是重要的细菌素之一，能同时抑制G⁺和G^－细菌，具有广谱抑菌作用，特别是对食品腐败和保鲜相关的微生物等具有良好的抑制作用，如单核细胞增生李斯特菌等多种李斯特菌及一些乳酸菌等；另外，肠道菌素具有良好的热稳定性、以及对多种蛋白酶、还原剂等有较好的稳定性，是食品生产中优良的保鲜和防腐添加剂。因此，肠道菌素广谱抑菌作用和良好的稳定性特性有望作为新型生物防腐剂用于食品的防腐保鲜及环保制剂。部分肠道菌素产生菌株则可以作为益生菌和发酵剂应用于保健食品和发酵食品的生产。

近年来，国外学者对肠道菌素及其产生菌株进行了大量研究，发现天然细菌素产生量少且获得过程比较复杂，限制了对其的广泛应用。另外，有些肠球菌是条件致病菌，含有毒力因子且具有抗生素抗性，引起了人们对其在食品应用中的安全性考虑。

Enterocin，其结构式如式1所示，公开于文献Seto H,Tsutomu S,Urano S,etal.Utilization of ¹³C-¹³C coupling in structural and biosynthetic studies.VII¹⁾ the structure and biosynthesis of vulgamycin[J].Tetrahedron Lett,1976,17(48):4367-4370和文献KangH,Jensen P R,Fenical W.Isolation of microbial antibiotics from amarine ascidian of the genus didemnum[J].J Org Chem,1996,61(4):1543-1546.中。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供链霉菌（Streptomyces qinglanensis）SCSIO 05256，该菌于2013年07月02日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，其保藏编号为CGMCC No.7865。

本发明的第二个目的是提供一种化合物Enterocin的制备方法，其特征在于，化合物Enterocin是从链霉菌SCSIO 05256的发酵培养物中制备分离得到的。

具体步骤如下：

a、制备链霉菌SCSIO 05256的发酵培养物；

b、将发酵培养物进行固液分离，得到发酵液和菌丝体，发酵液用丁酮萃取，丁酮萃取液浓缩后得浸膏A，菌丝体用丙酮浸提，浸提液浓缩后得浸膏B；

c、将浸膏A和浸膏B合并得到粗提物，粗提物经硅胶柱层析，以乙酸乙酯/石油醚为洗脱剂，从体积比1:9，2:8，3:7，4:6，5:5，6:4进行梯度洗脱，收集乙酸乙酯/石油醚5:5洗脱的馏分，再用中压反相柱层析，用甲醇/水梯度洗脱，0～60min,5%～60%体积分数，流速18mL/min，收集保留时间为30min的馏分，再经正相硅胶柱层析，以二氯甲烷/甲醇为洗脱剂，从体积比99:1，98:2，97:3，96:4，95:5，94:6梯度洗脱，收集二氯甲烷/甲醇96:4洗脱的馏分，即为化合物Enterocin。

本发明的第三个目的是提供链霉菌SCSIO 05256在制备化合物Enterocin中的应用；

本发明的第四个目的是提供链霉菌SCSIO 05256及其发酵产物等在制备防腐保鲜剂中的应用。

本发明的第五个目的是提供链霉菌SCSIO 05256及其发酵产物等在制备微生态制剂及环保制品中的应用；

本发明的第六个目的是提供化合物Enterocin在制备抗菌药物中的应用。

所述的抗菌药物优选为抗藤黄微球菌、苏云金芽孢杆菌或嗜水气单胞菌等该类微生物的药物。

本发明提供了一种新的海洋链霉菌SCSIO 05256，该菌能够发酵高效大量产生肠道菌素化合物Enterocin，有望将该菌株改造为化合物Enterocin的工程菌株，或将该菌作为食品添加剂等应用为轻工食品、饲料等防腐保鲜，实现应用。