[发明专利]具有内化作用的酸敏感脂质体给药系统及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种具有内化作用的酸敏感脂质体给药系统，其特征在于细胞穿透肽通过长链有机酸直接偶联于脂质体表面，同时具有酸敏感性的聚乙二醇-腙键-长链有机酸偶联物修饰脂质体表面。其制备工艺包括如下步骤：

(1)载药普通脂质体的制备：负载脂溶性药物的方法：适量磷脂、胆固醇及其衍生物、长链有机酸，脂溶性药物溶于有机溶剂，25～60℃下旋转蒸发成膜，等渗溶液水化即得；对于水溶性蒽醌类弱碱性药物的方法：适量磷脂、胆固醇及其衍生物、长链有机酸，溶于有机溶剂，旋转蒸发成膜，加入酸性(包括有机酸或无机酸)水溶液水化，然后再调节外水相为弱碱性pH7.5～8.0，加入水溶性蒽醌类弱碱性药物孵育过夜，即得。

(2)具有内化作用脂质体制备：在步骤(1)得到的载药普通脂质体溶液中，加入适量1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCl)EDCl和巯基化-N-羟基丁二酰亚胺(s-NHS)活化脂质体中的长链有机酸，调节pH为10～12，再加入CPP得到具有内化作用的CPP修饰脂质体，其中CPP修饰密度为磷脂物质的量的4％～8%，优选4％。

(3)具有内化作用的算敏感脂质体的制备：加入聚乙二醇-腙键-长链有机酸，孵育过夜。其密度为磷脂物质的量的8％～20％，优选8%。

(4)用截留分子量5000Da～300000Da的透析袋透析4h～48h或用截留分子量5000Da～300000Da的超滤管在4000g～15000g离心10min～30min，即得。优选截留分子量为10000Da，透析时间12h，离心速度为10000g，离心时间为20min。

2.根据权利要求1所述的给药系统的组成，其特征在于：所述细胞穿透肽为多聚精氨酸短肽，优选序列为Gly-Gly-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg(GGRRRRRRRRR)。

3.根据权利要求1中所述的给药系统，其特征在于：聚乙二醇-腙键-长链有机酸的合成方法为：醛基化聚乙二醇(mPEG-CHO)溶于含稍过量的3-(2-吡啶二硫)丙酰肼(PDPH)的氯仿溶液中，室温反应48h，氩气保护中搅拌，合成mPEG-HZ-PDP。巯基化长链有机酸溶于无水氯仿，氯仿中含有过量mPEG-HZ-PDP，加入三乙胺，于室温中氩气保护下搅拌过夜。减压除去氯仿，偶联物用Sepharose CL-4B纯化，冷冻干燥得到白色粉末。

4.根据权利要求1所述的给药系统的组成，其特征在于所述聚乙二醇分子量为500Da～5000Da，优选2000Da。

5.根据权利要求1所述的给药系统，其特征在于长链有机酸选自硬脂酸、月桂酸、油酸、棕榈酸，肉豆蔻酸。优选硬脂酸。

6.根据权利要求1所述的给药系统，其特征在于：磷脂选自天然、半合成、全合成磷脂及其衍生物。优选的方案是所述磷脂选自但并不限于下述的大豆卵磷脂(SPC)、蛋黄卵磷脂(EPC)、卵磷脂酰甘油(EPG)、多烯磷脂酰胆碱、磷脂酸、心肌磷脂、鞘磷脂、磷脂酸丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、氢化大豆磷脂(HSPC)、氢化蛋黄卵磷脂(HEPC)、全合成磷脂，如C3至C30的各种合成磷脂，如二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二月桂酰磷脂酰胆碱(DLPC)、二硬脂酰磷脂酰甘油(钠盐DSPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(钠盐DPPG)、L-α-二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(钠盐DMPG)、二月桂酰磷脂酰甘油(DLPG)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二月桂酰磷脂酰乙醇胺(DLPE)、双二硬脂酰磷脂酰甘油(钠盐)、双二棕榈酰磷脂酰甘油(钠盐)、双二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(钠盐)、双二月桂酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰肌醇、二棕榈酰磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰磷脂酰肌醇、二月桂酰磷脂酰肌醇、棕榈酰油酰磷脂酰胆碱、棕榈酰亚油酰磷脂酰胆碱、硬脂酰亚油酰磷脂酰胆碱、硬脂酰有酰磷脂酰胆碱、硬脂酰花生四烯酰磷脂酰胆碱。

7.根据权利要求1中所述的给药系统，其特征在于，包括胆固醇及其衍生物(如胆固醇半琥珀酸酯)和谷甾醇。