[发明专利]一种人工培养难产孢病原真菌病害的简易诊断方法

权利要求书

1.一种人工培养难产孢病原真菌病害的简易诊断方法，其特征在于，该人工培养难产孢病原真菌病害的简易诊断方法包括以下步骤：

步骤一，选择用于获得病原菌的材料，从田间采取具有典型症状的病样，装入洁净的自封袋内，带回实验室在15℃下放置12h～24h，制备添加链霉素或孟加拉红，链霉素终浓度为30μg/mL，孟加拉红终浓度为33ug/mL的清水琼脂；

步骤二，在体视显微镜下观察典型症状部位的真菌结构，找到优势类群并挑取孢子，转移少量孢子到清水琼脂小方块上，然后用无菌的长针灸针或用细长的缝衣针制作的解剖针挑取单个孢子，按照单孢分离方法获得粘有单个孢子的琼脂块3个～5个；

步骤三，将琼脂块转移到添加抗细菌物质的PDA上培养直到长出菌落，得到一个确定形态的孢子对应的相应菌落；

步骤四，然后将培养物接种验证，通过发病部位的病原形态+分子数据信息（如ITS序列）共同鉴定病原物的种类。

2.如权利要求1所述的人工培养难产孢病原真菌病害的简易诊断方法，其特征在于，在步骤一中，放置时间不大于48h。

3.如权利要求1所述的人工培养难产孢病原真菌病害的简易诊断方法，其特征在于，在步骤二中，观察真菌结构还可以选择直接剪取病斑在光学显微镜低倍视野下。

4.如权利要求1所述的人工培养难产孢病原真菌病害的简易诊断方法，其特征在于，该人工培养难产孢病原真菌病害的简易诊断方法的诊断程序为症状观察，镜检病部，确定优势真菌，单孢子法分离，用单孢子对应的菌落进行致病性测定，完成柯赫法则，对致病菌进行鉴定，确定病害的真正病原菌。