[发明专利]一种定向突变的半乳糖基转移酶的应用

权利要求书

1.定向突变的半乳糖基转移酶1在生产不含乳糖或极低乳糖含量的天然奶中的应用，其中，所述的定向突变的半乳糖基转移酶1是通过基因工程手段定向突变牛野生型β1,4-半乳糖基转移酶1氨基酸序列第289位酪氨酸，或者猪野生型β1,4-半乳糖基转移酶1氨基酸序列第288位酪氨酸，或者其他哺乳动物相似位点的酪氨酸，使野生型β1,4-半乳糖基转移酶1的转移半乳糖基到乙酰氨基葡萄糖或葡萄糖上变为突变型β1,4-半乳糖基转移酶1的转移乙酰氨基半乳糖到乙酰氨基葡萄糖或葡萄糖上。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述的酪氨酸定向突变为亮氨酸。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于定向突变后的牛β1,4-半乳糖基转移酶1氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于定向突变后的猪β1,4-半乳糖基转移酶1氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

5.一种生产不含乳糖或极低乳糖含量的天然奶的方法，其特征在于对哺乳动物β1,4-半乳糖基转移酶1氨基酸序列特定位点的酪氨酸进行突变，使野生型β1,4-半乳糖基转移酶1的转移半乳糖基到乙酰氨基葡萄糖或葡萄糖上变为突变型β1,4-半乳糖基转移酶1的转移乙酰氨基半乳糖到乙酰氨基葡萄糖或葡萄糖上，从而使乳汁中的乳糖(Galβ1,4Glc)发生改变成为乳糖类似物(GalNAcβ1,4Glc)。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述的哺乳动物选自猪、牛或羊。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于将牛野生型β1,4-半乳糖基转移酶1氨基酸序列的第289位酪氨酸，或者猪野生型β1,4-半乳糖基转移酶1氨基酸序列的第288位酪氨酸定向突变为亮氨酸。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于定向突变后的牛β1,4-半乳糖基转移酶1氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于定向突变后的牛β1,4-半乳糖基转移酶1氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。