[发明专利]一种检测人心脏微血管损伤标志物miRNA21的引物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子诊断技术领域，具体地说，是一种检测人心脏微血管损伤标志物miRNA21的引物及其应用。

背景技术

前期研究发现，柯萨奇B3病毒（CVB3）感染能损伤心脏微血管。以往对于心脏微血管的损伤缺乏灵敏、特异的诊断方法，传统的病理学方法存在着操作复杂、有创性等缺点，病人难以接受，临床上无法推广应用。因此，寻找一种高灵敏、特异性强、操作方便且病人能够接受的检测方法有着重要的临床意义。

近年来的研究表明miRNA可能参与心血管系统的发育、分化和病理过程，其在心血管疾病中的调控作用日益受到重视。首先，miRNA的表达具有组织特异性，作为一类重要的调节因子，miRNA通过降解、翻译抑制或激活目标RNA调节其目标基因的表达，而循环血中存在的特异性miRNA则有望作为心血管疾病的特异性标志物。

中国期刊《中华医学会第十五次全国心血管病学大会论文汇编》，2013年刊出的论文《miRNA21通过靶基因PDCD4在柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的心脏微血管内皮细胞凋亡中的作用和机制》，作者探讨了miRNA21通过靶基因程序性死亡蛋白4(PDCD4)在柯萨奇B3病毒(CVB3)诱导的心脏微血管内皮细胞凋亡中的作用和机制，通过在CVB3感染的CMECs模型上，采用miRNA芯片和qRT-PCR筛选并验证表达显著差异的miRNA21，发现CMECs感染CVB3后miRNA21的表达上调了3.65倍，提示miRNA21可作为检测CVB3诱导的心脏微血管损伤的标志物，为病毒性心肌炎和扩张性心肌病的临床诊断、疗效及预后判断提供了新的指标。但是目前关于可特异性检测miRNA21且灵敏度高，检测方法简单快捷，能充分满足临床需求的诊断试剂及方法还未见报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种检测人心脏微血管损伤标志物miRNA21的引物。

本发明的再一的目的是，提供上述引物的用途。

本发明的另一的目的是，提供一种诊断人心脏微血管损伤的试剂盒。

本发明的第四个目的是，提供上述试剂盒的用途。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

一种检测人心脏微血管损伤标志物miRNA21的引物，所述的引物的序列为：

引物I：5’GCGGTAGCTTATCAGACTG3’；

引物II：5’ CAGTGCGTGTCGTGGAGT3’

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

如上所述的引物在制备检测或诊断人心脏微血管损伤药物中的应用。

其中，所述的人心脏微血管损伤可以是柯萨奇B3病毒感染所致的心脏微血管损伤，如病毒性心肌炎、扩张性心肌病等。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：

一种诊断人心脏微血管损伤的试剂盒，所述的试剂盒包括如上所述的引物。

优选地，所述的试剂盒还包括以下引物：

引物III：5’GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT3’；

引物IV：5’CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT3’。

优选地，所述的试剂盒还包括dNTPs、Taq DNA聚合酶和PCR反应液。

为实现上述第四个目的，本发明采取的技术方案是：

如上任一所述的试剂盒在制备检测或诊断人心脏微血管损伤药物中的应用。

其中，所述的人心脏微血管损伤可以是柯萨奇B3病毒感染所致的人心脏微血管损伤。

本发明优点在于：本发明的引物能用于检测或诊断人心脏微血管损伤，尤其是柯萨奇B3病毒感染所致的人心脏微血管损伤，相比于其它引物特异性、灵敏度都显著较高，从而为该疾病的临床诊断提供了一种特异性强、灵敏度高、快捷的检测方法，且易于被患者接受，适于制备成试剂盒在临床上普遍推广。

附图说明

附图1是病毒性心肌炎组与对照组外周血中miRNA21表达差异比较。

附图2是miRNA21扩增曲线。

附图3是内参U6扩增曲线。

附图4是miRNA21溶解曲线。

附图5是内参U6溶解曲线。

具体实施方式

下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

实施例1  qRT-PCR检测人外周血中miRNA21表达

一、标本采集