[发明专利]利用啤酒废酵母制备风味酵母提取物及多糖的方法

权利要求书

1.一种利用啤酒废酵母制备风味酵母提取物及多糖的方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）浆状的啤酒废酵母加水稀释，经80目筛粗滤2次，得酵母悬浮液；向酵母悬浮液中加浓度为5%的酒石酸脱苦，30分钟后，按照3500转/分的转速进行离心旋转15分钟，弃掉上清液，得纯化的啤酒废酵母；

（2）向纯化的啤酒废酵母中加纯水悬浮酵母细胞，纯化的啤酒废酵母：纯水=1：2；向酵母悬浮液中加入溶有壳聚糖的醋酸溶液和5’-磷酸二酯酶粗酶液，pH值调至2.5-7.5，并在30℃-54℃的温度条件下搅拌10-20小时；自动裂解后的酵母悬浮液按照4000转/分的转速进行离心旋转20分钟；产生的上清液过分子量为5000的超滤膜除去大分子物质；超滤滤过液再过分子量为200-300的纳滤膜，纳滤浓缩液在温度为70℃，浓度为30%的乙醇溶液中抽提20分钟，干燥后，制得海藻糖；超滤浓缩液和纳滤滤过液经喷雾干燥后，制得风味酵母提取物；

（3）收集步骤（2）产生的沉淀物，即酵母细胞壁，将其悬浮于蒸馏水中，然后，通过高压匀质仪进行匀质处理；采用氢氧化钠溶液将经匀质处理的悬浮液的pH值调至7.0；搅拌并加热悬浮液至125℃，5小时后，冷却至45℃，再用蒸馏水稀释，并按照4000转/分的转速进行离心旋转10分钟；得到的一次沉淀物用蒸馏水洗涤2次，备用；上清液转移至新的容器中，搅拌并加入乙醇，直到含水量达到30%，搅拌混合均匀后，置于5℃的条件下过夜；次日过滤，得到的二次沉淀物用浓度为70%的乙醇洗涤2次，并用旋转蒸发仪回收乙醇；经洗涤并回收乙醇的二次沉淀物在70℃的条件下真空干燥，制得无色无定型粉末，即为粗甘露聚糖；粗甘露聚糖通过Sephsdex G-75层析柱提纯，制得精甘露聚糖；

（4）将步骤（3）中经洗涤的一次沉淀物悬浮于蒸馏水中，总体积至10L，加热至45℃，并用氢氧化钠溶液调pH值调至10.5；持续搅拌，并在时间点为0、1.5小时、3小时分别加入Savinase蛋白酶，每次加入量为7.5ml；持续作用5小时后，用醋酸中和，并按照4000转/分的转速进行离心旋转10分钟；得到的三次沉淀物用蒸馏水洗涤2次，再用乙醇洗涤3次，并用旋转蒸发仪回收乙醇；经洗涤并回收乙醇的三次沉淀物在70℃的条件下真空干燥，制得浅黄色粉末；取40毫克浅黄色粉末，使其溶解于175微升蒸馏水中，经DEAE-Sephacel柱层析处理除去残留的蛋白质，包含有β-葡聚糖的没有结合的部分用缓冲液洗脱后收集，得到葡聚糖样品；为除去葡聚糖样品中残留的甘露聚糖，用伴刀豆球蛋白A-琼脂糖凝胶柱对葡聚糖样品进行纯化，包含有β-葡聚糖的没有结合的部分用缓冲液洗脱后收集，用双蒸水透析后，冷冻干燥制得高纯度的β-葡聚糖。