[发明专利]检测rs632793位点的方法及冠心病左心室收缩功能不全相关基因的检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域。更具体地，涉及人心房钠肽/脑钠肽（NPPA/NPPB gene）的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点rs632793及其与左心室收缩功能相关性的检测。本发明还涉及检测这个SNP位点的方法和试剂盒。

背景技术

心力衰竭是危害全球人类健康的主要疾病之一，具有高死亡率，高发病率，高住院率和高住院费用的特点。左心室收缩功能不全（左心室射血分数＜45%）是充血性心力衰竭发生的早期阶段，对左心室收缩功能不全的风险预测和评估有助于延缓心力衰竭的进程，改善心力衰竭病人的生活质量和预后。冠心病是造成左心室收缩功能不全最主要的病因之一。在冠心病病人中，左心室收缩不全的临床表现尤为严重，可迅速进展为心力衰竭，预后极差。目前迫切需要发现冠心病病人发生左心室收缩功能不全的风险预测指标和预后评估靶点。

随着分子医学的发展，左心室收缩功能不全认为是遗传因子和环境共同作用的结果。对于环境因素的控制虽然在一定程度上可延缓左心室收缩不全的发病和预后，但对于固有的遗传因素的认识不足极大地妨碍了对左心室收缩功能不全的研究和判断。

目前研究表明左心室收缩功能不全及其随后心力衰竭的发生是由一系列神经-体液因素参与。其中，利钠肽家族扮演重要角色。利钠肽家族是一组由心肌细胞分泌的激素，具有相似的化学结构和生理学效应，主要包括调节血压，抗心肌肥厚，抗心力衰竭等作用。De Bold等通过电子显微镜首次发现心房肌细胞分泌的颗粒中包含心房利钠肽（ANP）[de Bold AJ,Borenstein HB,Veress AT,et al.A rapid and potent natriuretic response to intravenous injection of atrial myocardial extract in rats.Life Sci,1981,28(1):89-94.]。随后另一利钠肽家族成员-脑钠肽（BNP）在猪脑中发现。ANP和BNP的作用相似，基因位置毗邻，形成NPPA-NPPB基因座。NPPA基因（GeneID4878）缺失小鼠血压显著升高，心肌肥厚增加。NPPB基因（GeneID4879）缺失小鼠心肌广泛纤维化。BNP与其终末端结构（NT-proBNP）升高被公认为左心室功能障碍和心力衰竭的预测指标。

尽管如此，对于利钠肽家族是否对冠心病病人发生左心室收缩功能不全的风险评估目前尚无定论，这正是当前研究左心室收缩功能不全的主要方向之一。

发明内容

本发明的目的是提供一种NPPA/NPPB基因座启动子的单核苷酸多态性基因型的方法。

本发明的另一个目的是提供一种NPPA/NPPB基因座启动子的单核苷酸多态性基因型的检测试剂盒。

本发明的再一个目的是提供一种NPPA/NPPB基因座启动子的单核苷酸多态性基因型的检测试剂盒的应用。根据NPPA/NPPB基因座启动子的单核苷酸多态性基因型的分型结果，可以用于辅助预测或者判断冠心病患者的左心室收缩功能不全的易感性。

本发明提供了一种检测NPPA/NPPB基因座启动子的单核苷酸多态性基因型的方法，该方法包括步骤：

用NPPA/NPPB基因座启动子的特异性引物扩增样品的基因组DNA，得到扩增产物；

和

检测(a)所得的扩增产物中单核苷酸多态性位点rs632793的基因。

所述的单核苷酸多态性的位点是rs632793。

rs632793位于NPPA/NPPB基因座启动子中，片段重叠群contig：NT_021937.18位置6448044A/G。

其中，脱氧核糖核酸（DNA）序列编号：rs632793位置基于SEQ ID NO：1/6；扩增产物基于SEQ ID NO：6/6。

所述的NPPA/NPPB基因座启动子的特异性引物的序列如SEQ ID NO2和SEQ ID NO3所示。

在本发明的一个实施例中，扩增反应时，退火/延伸的温度为60℃。更好的，在扩增反应的标准反应中，退火和延伸的步骤均为：60℃，30秒。

所述的扩增产物的序列如SEQ ID NO6所示。

所述的方法包括利用与位点rs632793结合的探针检测NPPA/NPPB基因座启动子的单核苷酸多态性基因型。

第二方面，本发明还提供了一种针对冠心病病人左心室收缩功能不全易感基因的检测试剂盒，它包括特异性扩增NPPA/NPPB基因座启动子的引物。