[发明专利]出血性大肠杆菌O157:H7酶联免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和免疫学领域，具体涉及一种检测出血性大肠杆菌O157:H7的酶联免疫试剂盒。 

背景技术

出血性大肠杆菌O157:H7（Escherichia coli O157:H7）是肠道大肠杆菌的主要血清型，可通过牛肉及其制品、牛奶及其制品、鸡肉、蔬菜、水果、饮料、水等传播。出血性大肠杆菌O157:H7可引起肠炎，受感染病人的典型临床症状为血便、腹痛、低热或不发热，约有10%的病人可发展成为溶血性尿毒症及血栓性血小板减少性紫癜，并且可对被感染病人的肠道、肝、脾、肾、淋巴、脑、呼吸系统和神经系统造成损伤。老人和儿童为高危人群，易发生溶血性尿毒症，死亡率高达30%以上。世界卫生组织已经将出血性大肠杆菌O157:H7肠炎列为新发传染病。出血性大肠杆菌O157:H7感染已经成为一个世界性的卫生问题。 

目前出血性大肠杆菌O157:H7的检测主要依赖于国标所规定的生化鉴定，其缺点是操作繁琐、检测周期较长，无法适应大量的样品筛查。分子生物学和免疫学检测是近年来出现的最快速、准确、稳定的快速检测手段，但是检测产品全部依赖进口，我国目前尚无拥有完全自主知识产权，且可运用于检测实践的快速检测产品，该专利以出血性大肠杆菌O157:H7为检测靶标，所要求保护的技术涉及出血性大肠杆菌O157:H7快速检测产品。 

发明内容

本发明的目的是提供一种检测出血性大肠杆菌O157:H7的试剂盒。 

进而，本发明提供了一种用于检测出血性大肠杆菌O157:H7的酶联免疫试剂盒，所述的试剂盒含有： 

（a）固相载体，所述的固相载体上包被有作为捕捉抗体的抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体3A8F11B10E7，所述的抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体3A8F11B10E7由小鼠杂交瘤细胞系3A8F11B10E7，CGMCC No.8458产生； 

（b）容器a，所述的容器a中装有作为检测抗体的抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体GS2-D3，所述的抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体GS2-D3由小鼠杂交瘤细胞系GS2-D3，CGMCC No.6610产生。 

在一优选例中，所述的固相载体为酶标反应板。 

在另一优选例中，所述的检测抗体带有可检测的标记物。 

在另一优选例中，所述的可检测的标记物为辣根过氧化物酶。 

在另一优选例中，所述的试剂盒还含有阳性对照和阴性对照。 

在另一优选例中，所述的阳性对照为灭活的出血性大肠杆菌O157:H7菌液，所述的阴性对照为灭菌的改良E.C新生霉素增菌肉汤。 

本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本发明的特点、目的和优势将更为明显。 

附图说明

图1  本发明的单克隆抗体的SDS-PAGE电泳图 

Lane1：GS2-D3，Lane2：3A8F11B10E7。 

具体实施方式

本发明人的研究表明，以出血性大肠杆菌O157:H7作为免疫原，免疫Balb/c小鼠，分离纯化得到两株抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体，即3A8F11B10E7，保藏号CGMCC No.8458和GS2-D3，保藏号CGMCC No.6610，上述两株单克隆抗体的抗体效价可达到1:100000，其能够特异性、高效地与出血性大肠杆菌O157:H7结合。以上述单克隆抗体3A8F11B10E7包被酶标反应板作为捕捉抗体，用辣根过氧化物酶标记的上述单克隆抗体GS2-D3作为检测抗体，制作酶联免疫检测试剂盒，结果显示，上述出血性大肠杆菌O157:H7检测试剂盒检测灵敏度达到10⁵cfu/ml，具有重复性、准确性好的优点，孔间误差小于5%，板内CV小于3%。其与单增李斯特菌、沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血弧菌、阪崎肠杆菌、小肠耶尔森氏菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、蜡样芽孢杆菌、其他大肠杆菌等共计76种病原细菌均无交叉反应。 

在此基础上，本发明人进而根据双抗体夹心酶联免疫法，经过反复测试，终于获得了一种可快速、高效检测食源性出血性大肠杆菌O157:H7的酶联免疫试剂盒。 

抗体