[发明专利]检测出血性大肠杆菌O157:H7的方法及其单抗

说明书

技术领域

本发明属于微生物检测领域。具体而言，本发明涉及一种检测出血性大肠杆菌O157:H7的方法、用于该方法的两株抗出血性大肠杆菌O157:H7单克隆抗体及其用途以及产生该单克隆抗体的杂交瘤细胞。 

背景技术

出血性大肠杆菌O157:H7（Escherichia coli O157:H7）是肠道大肠杆菌的主要血清型，可通过牛肉及其制品、牛奶及其制品、鸡肉、蔬菜、水果、饮料、水等传播。出血性大肠杆菌O157:H7可引起肠炎，受感染病人的典型临床症状为血便、腹痛、低热或不发热，约有10%的病人可发展成为溶血性尿毒症及血栓性血小板减少性紫癜，并且可对被感染病人的肠道、肝、脾、肾、淋巴、脑、呼吸系统和神经系统造成损伤。老人和儿童为高危人群，易发生溶血性尿毒症，死亡率高达30%以上。世界卫生组织已经将出血性大肠杆菌O157:H7肠炎列为新发传染病。出血性大肠杆菌O157:H7感染已经成为一个世界性的卫生问题。 

目前出血性大肠杆菌O157:H7的检测主要依赖于国标所规定的生化鉴定，其缺点是操作繁琐、检测周期较长，无法适应大量的样品筛查。分子生物学和免疫学检测是近年来出现的最快速、准确、稳定的快速检测手段，但是检测产品全部依赖进口，我国目前尚无拥有完全自主知识产权，且可运用于检测实践的快速检测产品，该专利以出血性大肠杆菌O157:H7为检测靶标，所要求保护的技术涉及出血性大肠杆菌O157:H7快速检测产品。 

发明内容

本发明的目的是提供一种体外检测出血性大肠杆菌O157:H7的方法。 

本发明的另一个目的是提供用于上述方法的两株由同一次单克隆抗体制备过程产生的可特异性地结合于出血性大肠杆菌O157:H7不同抗原位点的单克隆抗体。 

本发明的另一个目的是提供产生上述单克隆抗体的杂交瘤细胞。 

本发明的第一方面是提供了一种体外检测出血性大肠杆菌O157:H7的方法，包括以下步骤： 

（a）将待测样品加样于包被有捕捉抗体的固相载体，从而使待测样品中的出血性大肠杆菌O157:H7与固相载体上的捕捉抗体结合，形成带有“出血性大肠杆菌O157:H7-捕捉抗体” 二元复合物的固相载体；所述的捕捉抗体是特异性地结合于出血性大肠杆菌O157:H7的单克隆抗体3A8F11B10E7，所述的单克隆抗体3A8F11B10E7由小鼠杂交瘤细胞系3A8F11B10E7，CGMCC No.8458产生； 

（b）将检测抗体加样于（a）获得的固相载体，从而形成带有“检测抗体-出血性大肠杆菌O157:H7-捕捉抗体”三元复合物的固相载体；所述的检测抗体是特异性地结合于出血性大肠杆菌O157:H7的单克隆抗体GS2-D3，所述的单克隆抗体GS2-D3由小鼠杂交瘤细胞系GS2-D3，CGMCC No.6610产生，且所述的单克隆抗体GS2-D3携带一可检测标记物；和 

（c）检测三元复合物中的可检测标记物，从而确定待测样品中出血性大肠杆菌O157:H7的存在与否以及存在的量。 

在一优选例中，所述的固相载体为酶标反应板。 

在另一优选例中，所述的可检测标记物为辣根过氧化物酶。 

本发明的第二方面是提供了一种免疫球蛋白，它是特异性地结合于出血性大肠杆菌O157:H7的单克隆抗体，它由小鼠杂交瘤细胞系3A8F11B10E7，CGMCC No.8458所产生。 

在一优选例中，上述免疫球蛋白是以出血性大肠杆菌O157:H7，ATCC No.43895免疫Balb/c小鼠获得。 

本发明的第三方面是提供了一种产生上述单克隆抗体的杂交瘤细胞，它是小鼠杂交瘤细胞系3A8F11B10E7，CGMCC No.8458。 

在一优选例中，上述杂交瘤细胞产生的单克隆抗体可特异性地结合于出血性大肠杆菌O157:H7。 

本发明的第四方面是提供了上述免疫球蛋白的用途，它被用于检测出血性大肠杆菌O157:H7。 

本发明的第五方面是提供了一种免疫球蛋白，它是特异性地结合于出血性大肠杆菌O157:H7的单克隆抗体，它由小鼠杂交瘤细胞系GS2-D3，CGMCC No.6610所产生。 

在一优选例中，上述免疫球蛋白是以出血性大肠杆菌O157:H7，ATCC No.43895免疫Balb/c小鼠获得。 

本发明的第六方面是提供了一种产生上述单克隆抗体的杂交瘤细胞，它是小鼠杂交瘤细胞系GS2-D3，CGMCC No.6610。