[发明专利]棉铃虫转铁蛋白基因HaTrf及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地说，涉及棉铃虫转铁蛋白基因HaTrf及其应用。

背景技术

化学杀虫剂的广泛使用对于有害生物的控制非常有用，但长时间以及大规模的使用化学杀虫剂，对于环境以及高等食肉动物的危害也是不可忽视的，化学杀虫物质的积累导致对这些物质抗性的发展，并且可能在进化梯中高等的物种中，成为诱变剂和/或致癌物，导致不可逆的和有害的遗传修饰。植物次生物质具有对病虫草害防治效果好、且对人畜安全、不污染环境、无残留对、病虫草害特异性强、源于自然易被降解、害虫和病菌难以产生抗药性等优点。

植物次生性物质是其在代谢过程中形成的产物，是植物自卫的武器，植物通过次生物质影响昆虫的取食形成忌避效果或影响昆虫的消化来保护自己，植物次生性物质对昆虫的寄主选择、取食及生长发育具有重要的影响。昆虫在进化过程中也形成了特有的解毒排毒机制，弱化植物次生物质的影响。昆虫从寄主植物获取营养成分后通过代谢作用从而完成生长发育全过程。植物通过自身所含营养成分的质和量，以及种类繁多的次生代谢产物，来影响植食性昆虫对寄主的趋性取食活动，进而影响昆虫的生长发育和繁殖，造成昆虫种群的波动。植物次生物质对昆虫的影响及昆虫对植物次生物质的适应，反映了植物与昆虫的协同进化。利用分子生物学技术对作物进行改良，提高作物自身的抗虫性或将化学防治与植物自身的抗性相结合的研究，将减少化学农药的用量。植物次生性物质作为一种植物的防御性物质能够诱导昆虫中防御性基因的表达，例如植物次生物质能够诱导昆虫的解毒酶基因的表达。利用分子生物学手段干扰昆虫潜在的防御基因，从而提高昆虫对植物次生性物质的敏感性，对制定新的抗药性综合治理策略具有深远的意义。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种棉铃虫转铁蛋白基因HaTrf，其编码的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。

进一步地，其全长编码序列如SEQ ID No.1所示。

本发明还提供了用于扩增前述转铁蛋白基因编码序列的引物对，包括正向引物F：5’-GCCATGGTATCAAAAATAAAATATAT-3’和反向引物R：5’-AATAACATCATGGATTTGCTTGAA-3’。

本发明还提供了所述转铁蛋白基因HaTrf在抑制棉铃虫的生长发育中的应用。

进一步地，所述应用具体包括以下步骤：

1）以权利要求1或2所述转铁蛋白基因为模板，利用利用引物F1：CAAGCAGACATCGTGCCAGT和引物R1：GTCTAGCTGCCCAGGAACAG，扩增得到棉铃虫转铁蛋白基因部分序列，所述部分序列如SEQ ID No.2所示；

2）根据步骤1）扩增得到的棉铃虫转铁蛋白基因部分序列，用于通过体外转录试剂盒合成HaTrf基因的dsRNA，该dsRNA后与棉铃虫人工饲料混合饲喂2龄棉铃虫幼虫。

优选地，所述dsRNA的饲喂以双蒸水为载体，dsRNA的饲喂量为35μg/g。

本发明还提供了所述转铁蛋白基因HaTrf在提高棉铃虫对植物次生物质2-十三烷酮的敏感性中的应用。

进一步地，所述应用具体包括以下步骤：

1）以权利要求1或2所述转铁蛋白基因为模板，利用利用引物F1：CAAGCAGACATCGTGCCAGT和引物R1：GTCTAGCTGCCCAGGAACAG，扩增得到棉铃虫转铁蛋白基因部分序列，所述部分序列如SEQ ID No.2所示；

2）根据步骤1）扩增得到的棉铃虫转铁蛋白基因部分序列，设计HaTrf基因的dsRNA，通过体外转录试剂合成dsRNA后与植物次生物质2-十三烷酮及棉铃虫人工饲料混合饲喂2龄棉铃虫幼虫。

优选地，所述dsRNA的饲喂以双蒸水为载体，dsRNA的饲喂量为35μg/g。

本发明的有益效果在于：

本发明提供来自棉铃虫转铁蛋白基因HaTrf的基因全长以及用于合成dsRNA的序列，根据本发明的提供的基因全长及用于合成dsRNA的序列能够用于干扰棉铃虫转铁蛋白基因的表达，使棉铃虫出现生长抑制，并提高了昆虫对植物次生性物质的敏感性。

dsRNA干扰方法可提高作物抗虫性从而应用于对棉铃虫的防治，对于解决由于化学杀虫剂导致的生态恶化以及杀虫剂抗性等问题都有积极意义。

附图说明

图1为HaTrf全长电泳图。