[发明专利]一种菹草的组织培养方法

权利要求书

1.一种菹草的组织培养方法，其特征在于，该方法步骤为，从沉水植物菹草上剪取带节茎段，在自来水中浸泡后剪去叶片，用去离子水冲洗；在超净工作台内灭菌，然后把茎段剪成1cm左右的小段，且每一段上须含一个茎节，得到组培的外植体；最后，转接到底部有MIII固体培养基的玻璃瓶中培养；将玻璃瓶置于无菌培养室，条件：温度为25±1℃，光暗比12h：12h，培养直到生根；在超净工作台内将生根的外植体从固体培养基上转接到无菌的MIII液体培养基中，继续置于无菌培养室，条件：25±1℃，光暗比12h：12h，培养成为长势健康的幼苗。

2.根据权利要求1所述的一种菹草的组织培养方法，其特征在于，该方法具体的步骤为，从沉水植物菹草上剪取嫩尖部分的带节茎段，长约10cm，在自来水中浸泡1小时，剪去叶片，用去离子水冲洗3遍；在超净工作台内灭菌，然后把茎段剪成1cm左右的小段，且每一段上须含一个茎节，得到组培的外植体；最后，转接到底部有MIII固体培养基的玻璃瓶中培养；置于无菌培养室，条件：25±1℃，光暗比12h：12h，培养直到生根；在超净工作台内将生根的外植体从固体培养基上转接到无菌的MIII液体培养基中，继续置于无菌培养室，条件：25±1℃，光暗比12h：12h，培养成为长势健康的幼苗。

3.根据权利要求1或2所述的一种菹草的组织培养方法，其特征在于，MIII液体培养基的配制方法步骤为：以总体积1L计：

1）大量元素称量并根据顺序先后溶解于一定量的纯水中，大量元素包括：0.0848gNa₂SiO₃.5H₂O，0.0425g NaNO₃，0.0068g KH₂PO₄，0.086g CaSO₄·2H₂O，0.00745g KCl，0.0735gCaCl₂·2H₂O，0.0615g MgSO₄·7H₂O；

2）加入少许1N的盐酸溶液，搅拌使物质溶解（可用微波加热或超声波处理助溶）；

3）加入1ml的100倍微量元素母液；微量元素母液的配方为：取30.8g H₃BO₄，12.08gMnSO₄.4H₂O，2.209g ZnSO₄.7H₂O，0.968g Na₂MoO4.2H₂O，1g CuSO₄.5H₂O，3.792gAlK(SO₄)₂.12H₂O，0.952g CoCl₂.6H₂O，1.124g NiSO₄.7H₂O，0.952g KBr，0.664g KI，0.774gH₂SeO₃，溶解于水，定容至100ml;

4）加入10ml Fe-EDTA溶液（需预先配制FeCl₃贮备液：将2.7g FeCl₃.6H2O和10ml0.1N HCl溶解于蒸馏水中，最终定容至100ml，得到FeCl₃贮备液；然后配制Fe-EDTA溶液：将0.372gNa₂EDTA.2H2O溶于大约400ml蒸馏水中，加入5ml上述FeCl₃贮备液，用高压灭菌锅灭菌，取出冷却至室温后在无菌条件下用无菌蒸馏水定容至500ml）；

5）定容至1L，调整pH为6.0；

6）高温高压灭菌，取出冷却至室温后使用，或直接置于冰箱冷藏，每次使用前要恢复至室温。

4.根据权利要求1或2所述的一种菹草的组织培养方法，其特征在于，MIII固体培养基的配方为：以总体积1L计：完成MIII液体培养基配制的1～4步骤后，加入6g琼脂，20g蔗糖；加热，煮沸后加入植物激素1mg6-BA、0.1mg NAA，定容至1L，调整pH为6.0；高温高压灭菌，取出凝固后使用，或直接置于冰箱冷藏。

5.根据权利要求1或2所述的一种菹草的组织培养方法，其特征在于，在超净工作台内灭菌的方法为，首先使用浓度为0.01%升汞灭菌4min，间歇10min，再使用浓度为0.01%升汞灭菌4min。