[发明专利]一种产G418单组分的工程菌及其应用有效
| 申请号： | 201410030139.0 | 申请日： | 2014-01-23 |
| 公开（公告）号： | CN103865840A | 公开（公告）日： | 2014-06-18 |
| 发明（设计）人： | 洪文荣;阙新桥;胡育龙 | 申请（专利权）人： | 福州大学;福州市鼓楼区荣德生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N15/74;C12P19/50;C12R1/31 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350108 福建省福州市*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 g418 组分 工程 及其 应用 | ||
1.一种产G418单组分的工程菌，其特征在于：所述工程菌为绛红色小单孢菌GQ175，该菌株已于2013年12月6日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保蒇，保藏编号为CGMCC No. 8543。
2.一种如权利要求1所述的一种产G418单组分的工程菌的制备方法，其特征在于：通过敲除绛红小单孢菌中genQ基因序列，丧失其功能，主要包括以下步骤：
A. genQ同源重组质粒的构建；
B. 同源重组质粒导入绛红色小单孢菌；
C. 接合子的筛选；
D. 工程菌组分的鉴定。
3.根据权利要求2所述的一种产G418单组分的工程菌的制备方法，其特征在于：基因置换的方法为PCR分别获得genQ基因上下游分子量2000bp的两个片段作为交换臂，将两者同时连接到pKC1139中，得到同源重组质粒pDB303。
4.根据权利要求2所述的一种产G418单组分的工程菌的制备方法，其特征在于：转化是以E coliET12657/pUZ8002介导的结合转移方法。
5.根据权利要求2所述的一种产G418单组分的工程菌的制备方法，其特征在于：所述的筛选为先筛选安普霉素抗性菌株，传代后再从中筛选到安普霉素敏感菌株，再从中筛选到不产庆大霉素复合物而单产G418的转化子。
6.根据权利要求2所述的一种产G418单组分的工程菌的制备方法，其特征在于：所述的鉴定为发酵滤液采用薄层层析TLC、新组分采用HPLC-ELSD分析和MS分析。
7.一种如权利要求1所述的一种产G418单组分的工程菌在制备抗菌药物和抗生素药物中的应用。
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