[发明专利]引物对及其应用及检测SEPT9DNA甲基化状态的试剂盒

权利要求书

1.一种引物对，其特征在于，该引物对包括：如SEQ ID No：1所示的上游引物和如SEQ ID No：2所示的下游引物。

2.一种检测SEPT9DNA甲基化状态的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：权利要求1所述的引物对和阻拦序列；所述阻拦序列为在对经亚硫酸氢盐处理的SEPT9DNA进行PCR扩增的退火过程中，优先于权利要求1所述的引物对特异性结合到未甲基化的SEPT9DNA上，并阻止权利要求1所述的引物对与未甲基化的SEPT9DNA结合的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其中，所述阻拦序列为SEQ ID No：3所示的序列，或者将SEQ ID No：3所示的序列经过一个或多个核苷酸的取代、缺失或添加后仍具有所述阻拦序列的性能的核苷酸序列；优选地，所述阻拦序列为SEQ ID No：3、SEQ ID No：4、SEQ ID No：5、SEQ ID No：6和SEQ ID No：7所示的序列中的一种或多种。

4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其中，所述试剂盒中还含有荧光染料和/或SEPT9Taqman探针，所述SEPT9Taqman探针能够在对经亚硫酸氢盐处理的SEPT9DNA进行PCR扩增的退火过程中，优先于权利要求1所述的引物对特异性结合到SEPT9DNA的非引物结合处。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其中，

所述染料选自FAM，VIC/JOE，NED/TAMRA/Cy3，ROX/TexasRed和Cy5中的一种或多种；

所述SEPT9Taqman探针为SEQ ID No：8所示的序列，或者将SEQ ID No：8所示的序列经过一个或多个核苷酸的取代、缺失或添加后仍具有所述探针的性能的核苷酸序列；优选地，所述SEPT9Taqman探针为SEQ ID No：8、SEQ ID No：9、SEQ ID No：10、SEQ ID No：11、SEQ ID No：12和SEQ ID No：13中的一种或多种。

6.根据权利要求2-5中任意一项所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还含有内参扩增引物、PCR反应试剂、细胞基因组DNA提取试剂和甲基化DNA的亚硫酸氢盐处理试剂中的一种或多种。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其中，内参扩增引物为β-肌动蛋白上游引物和β-肌动蛋白下游引物；所述β-肌动蛋白上游引物的序列如SEQ ID No：5所述，所述β-肌动蛋白下游引物的序列如SEQ ID No：6。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其中，所述试剂盒中还含有所述β-肌动蛋白Taqman探针；所述β-肌动蛋白Taqman探针的序列如SEQ ID No：7所示。

9.权利要求1所述的引物对在制备用于检测SEPT9DNA甲基化状态的试剂盒中的应用。