[发明专利]一种快速区分转基因植物及其产品的DNA检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及通过生物DNA检测技术检测转基因产品的来源，尤其是一种快速区分转基因植物及其产品的DNA检测方法。

背景技术

随着基因技术在农业生产上的广泛应用，市场上出现了大量的转基因生物制品，造成了公众难以避免的担心和焦虑。因此准确地检测转基因制品，追溯其来源，已成为转基因产品安全管理的重要一步。

现有转基因制品的检测方法主要是检测转基因本身。例如；检测抗昆虫转基因玉米就是检测转基因苏云金杆菌毒素基因是否存在（Bacillus thuringiensis，cry gene）；检测转基因抗草甘磷大豆就是检测转基因5-烯醇内酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶基因是否存在（Agrobacterium sp，EPSP gene）。虽然这样的检测方法能有效地区分转基因和非转基因产品，但它并不能区分几个类似的转基因产品。例如:它无法区分两个不同实验室构建的转基因抗昆虫玉米，因为转基因都是苏云金杆菌毒素基因；它亦无法区分具有相同转基因的不同物种，如转基因抗草甘磷大豆油和转基因抗草甘磷玉米油，因为转基因同为细菌的EPSP基因；它也无法区分一个实验室生产的几个转基因品系，因为这些品系具有同样的转基因，只是转基因的嵌入位点不同而已。

发明内容

本发明的目的是提供一种快速区分转基因植物及其产品的DNA检测方法，能够快速、准确的鉴定出转基因产品的来源。

一种快速区分转基因植物及其产品的DNA检测方法，其特别之处在于，包括如下步骤：

（1）提取并纯化已知转基因植物的DNA；

（2）选取转基因构建中已知DNA序列，设计PCR反应一端的引物；

（3）设计简并寡聚核苷酸，作为PCR反应另一端未知序列的引物；

（4）设计PCR反应，并扩增转基因及毗邻未知DNA序列；

（5）用凝胶电泳分离PCR产物，得出与每个转基因植物相应的特异的凝胶电泳图谱；

（6）提取待检测的植物或其产品的DNA，用与步骤（4）中相同的方法扩增转基因及毗邻序列，然后按步骤（5）的方法获得凝胶电泳图谱；

（7）比较待检测的植物或其产品与已知转基因植物的凝胶电泳图谱，以此确定未知转基因产品的来源。

步骤（7）中通过比较未知和已知植物或其产品的PCR凝胶电泳图谱来鉴定未知转基因产品的来源，如果图谱相同则说明待检测的植物或产品与已知转基因相同，如果图谱均不相同则说明待检测的植物或产品与已知转基因不同。

步骤（2）和（3）中PCR反应一端的引子是用转基因的已知序列设计的，而另一端的引子是由简并多聚核苷酸构成的。

步骤（5）中将所有需检测的已知转基因植物的DNA用上述PCR方法扩增，并建立其凝胶电泳图谱标准文库。

更进一步的，将未知转基因产品的DNA用同样的方法扩增，并与已知转基因植物凝胶电泳图谱标准文库比较，如果图谱相同则说明待检测的植物或其产品与已知转基因相同，如果图谱不相同则说明待检测的植物或其产品与已知转基因不同。

本发明提供了一种快速区分转基因植物及其产品的DNA检测方法，该方法利用转基因随机插入宿主基因组这一特性，鉴定转基因产品的来源。该方法的理论基础坚实，实验方法简单，且无需大型设备，从而为检验转基因产品提供了一个崭新的途径。

附图说明

附图1为本发明方法的流程图；

附图2为用巢式PCR扩增与转基因毗邻的宿主DNA序列；

附图3为用巢式PCR扩增转基因嵌入位点的上游序列和下游序列；

附图4为转基因农杆菌Ti质粒构建图，在该图中，与Left Border（LB）紧邻的3个寡聚核苷酸引子Kn1、Kn2、Kn3被用作扩增转基因下游序列的巢式PCR引子；与Right Border（RB）紧邻的3个寡聚核苷酸引子Kn4、Kn5、Kn6被用作扩增转基因上游序列的巢式PCR引子；

附图5为巢式PCR产物电泳图谱，用巢式PCR扩增4个独立产生的转基因紫花品系（Ln1、Ln2、Ln3、Ln4）DNA；第二次和第三次巢式PCR分别用2^nd和3^rd表示；根据设计，第二次巢式PCR产物比第三次巢式PCR产物略大，它们分别用箭头标出。

具体实施方式