[发明专利]一种多肽及包含该多肽的核酸药物纳米粒

说明书

技术领域

本发明涉及一种核酸药物制剂，具体涉及一种多肽及包含该多肽的核酸药物纳米粒。

背景技术

肝癌是世界上最常见、恶性度最高的肿瘤之一，位居全球恶性肿瘤发病率的第6位，致死率第3位。中国肝癌发病例数占全球55%，已成为致死率第2位的恶性肿瘤，每年有超过30万例肝癌患者死亡。治疗癌症的一种方法是利用RNA干扰引起的基因沉默。RNA干扰(RNA interference,RNAi)是1998年被发现并命名的一种抑制同源基因表达的现象。它通过小核酸分子与内源性mRNA形成RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC)，并迅速降解靶向mRNA，从而高效、特异地抑制目标基因的表达。大量的体外研究都已经证实了靶向癌基因的siRNA等小核酸分子可以有效抑制肿瘤细胞的生长与侵袭。与目前的一些靶向药物相比，它能实现单一特异性的精确抑制目的蛋白信号通路。

然而，RNA干扰技术迟迟未进入临床肿瘤治疗，主要原因是：（1）要实现RNA干扰技术中所使用的材料如siRNA、microRNA、short hairpin RNA、duplex RNA等进入RNA干扰机制，首先必须让其进入细胞内，但RNA是带高负电荷的亲水性分子，而且溶脂性极差，无法穿透细胞膜或被细胞内吞，在体外研究中可以采用物理或化学转染试剂的方法（如lipofectamine）而使RNA进入细胞，但体内时很难实现；（2）RNA稳定性差，在血浆中的半衰期仅为几分钟，同时由于具有免疫原性，其进入机体后会被免疫系统识别并迅速清除；（3）RNA缺乏靶向性，即使进入体内后也不能靶向性地进入特定组织（如肿瘤细胞）内。

如果能将siRNA等小核酸分子完整稳定地运输到靶细胞，RNAi技术有望进入临床治疗阶段。常用的基因传递载体主要分为病毒类和非病毒类。与病毒类载体相比，非病毒载体生物安全性较高，而且通过材料的合理设计与合成能够使载体具有较好的靶向能力与核酸药物的释放能力，因而近几年得到了足够的重视。常见的非病毒基因药物的传递载体往往为带有正电的阳离子化合物，包括聚阳离子、正电磷脂、壳聚糖、白蛋白、树枝状大分子以及多肽等，它们通过带正电的基团中和RNA上的负电磷酸基团，从而将核酸压缩保护成复合物颗粒，使得核酸药物能够顺利通过各种生物障碍，而完成基因传递。由于肿瘤部位的血管大量增生，与正常组织相比，具有如下特点：肿瘤血管的壁间隙较大、淋巴回流缺失，具有纳米尺寸(一般为<400nm)的材料对肿瘤血管具有比较高的通透性及滞留性(称为EPR效应)。因此设计更稳定、尺寸大小合适的载体体系是体内RNAi取得较好效果的先决条件。

多肽在作为基因载体上具有很多合成高分子不具备的优势：多肽有20种性质各异的氨基酸可以组成性质丰富的一级序列；通过设计可以拿到beta折叠或者alpha螺旋等二级结构；通过固相合成可以拿到纯度高、分布单一、结构明确的分子；可以很方便的改性或者连入生物可识别功能的靶向序列提高专一性。以多肽为原料的药物具有生产成本低、在体内可降解为氨基酸并被重复利用、生物相容性较高等优势而成为现代药物开发领域的热点。同时，一些多肽能够与某些肿瘤细胞表面的受体相互作用，作为抗体的替代产品，能够克服抗体生产成本高，分子量大等劣势，在肿瘤靶向药物载体使用中近些年广受关注，已成为最新的下一代靶向药物。此外，多肽中某些富含精氨酸(Arg)或者赖氨酸(Lys)的序列由于带较多正电荷，因此能够与带负电的核酸分子通过静电相互作用形成复合物。

发明内容

本发明提供了一种用作核酸药物传递载体的多肽，利用该多肽能够通过简单混合的方式与核酸形成不同N/P比例、具有纳米粒径、稳定的复合物，用以进行核酸体外和体内的传递和运送。

一种多肽，包含带正电荷的第一片段和具有靶向功能的第二片段。

利用该段多肽作为核酸药物传递载体，其第一片段通过静电作用与聚负电荷的核酸结合，形成复合物，第二片段则与肝癌细胞表面的受体结合，将核酸传递至肝癌细胞中，从而达到肿瘤治疗的目的。

作为优选，所述第一片段含有5～100个氨基酸残基；更优选为7～12个氨基酸残基；最优选为9个氨基酸残基。由于肽链较短，因此生产成本较低。氨基酸残基数目可视其传递的多核苷酸分子的大小而定。