[发明专利]一种天然产物6′-hydroxy justicidin B在制备治疗慢性粒细胞白血病药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于药物化学和细胞生物学技术领域，涉及6′-hydroxyjusticidin B(HJB)在制备治疗慢性粒细胞白血病药物中的应用。 

背景技术

白血病(Leukemia)是造血系统的恶性疾病，俗称“血癌”，是十大高发恶性肿瘤之一，其特点为造血组织中某一类型的白血病细胞在骨髓或其他造血组织中发生的恶性增生，并浸润体内各脏器、组织，导致正常造血细胞受抑制，产生各种症状。慢性粒细胞白血病(CML)是一种发生在早期多能造血干细胞上的恶性骨髓增殖性疾病，主要涉及髓系。大约95％的CML患者的原代细胞中出现Ph染色体，显带分析为t(9；22)(q34；q11)，其编码的Bcr/Abl融合蛋白具有异常增高的酪氨酸激酶活性，是导致CML发生的主要机制。 

目前用于CML临床治疗的化疗药物包括烷基化、抗代谢药、抗生素及激素和杂类等。这些药物毒副作用较强，且对机体内起重要防御作用的淋巴细胞、骨髓造血细胞的破坏较大，反而会使机体对肿瘤和感染失去抵抗力。近年来从中药及天然产物中寻找新的抗白血病活性物质群和活性成分已成为白血病研究的重点和热点领域之一。已应用于临床的具有抗白血病活性作用的中药包括砒霜和雄黄等；已确认的中药有效成分包括三氧化二砷、长春新碱及长春碱类药、喜树碱类、三尖杉碱类、鬼臼素类、紫杉醇类、苦参碱等。其作用机制包括抑制白血病细胞DNA、RNA合成、促进凋亡或诱导分化等。然而，尽管中药及天然产物已经广泛应用于抗白血病的治疗中，但目前在临床上多是采用辅助化学药物的复方治疗，而且其作用的分子机制尚未彻底阐明。 

HJB是从中药爵床中提取的活性成分，而本发明涉及的HJB是经过筛选纯化，高效液相色谱检测含量达95％以上。本课题前期研究表明HJB具有较强的抗白血病活性，其对K562、L1210及HL-60细胞具有明显的细胞毒性。迄今为止，关于HJB在制备治疗CML药物中的应用还未见报道。 

发明内容

本发明的目的是提供一种天然产物HJB在制备治疗慢性粒细胞白血病药物中的应用。 

本发明所述苦参碱的化学结构式： 

申请人经大量研究发现HJB在体外可显著抑制血液系统恶性肿瘤细胞株的的增殖，抑制胞内SOD活性并显著诱导细胞凋亡。本发明的具体研究结果阐述如下： 

首先，进行HJB对于CML细胞株生长抑制和诱导凋亡作用的研究。MTT法检测显示，苦参碱对白血病细胞株K562、L1210、HL-60均存在明显的生长抑制作用，具有浓度依赖性。 

其次，HJB能显著抑制胞内SOD酶活性，经Annexin V/PI双染，流式细胞仪分析凋亡，结果显示苦参碱对K562有明显的诱导凋亡作用，具有浓度依赖性。 

最后，HJB能显著增加active caspase-3酶活性，具有浓度依赖性。 

本发明首次公开了HJB在制备治疗CML药物中的应用，为寻找慢粒的新的治疗靶点HJB进入临床提供了理论依据。 

具体实施方式

本发明结合附图和实施例作进一步的说明，但所举实例只用于解释本发明，并非限制本发明的范围。 

实施例1：天然产物HJB制备方法 

取5kg干燥爵床全草粗粉用95％乙醇提取三次，合并提取液，减压干燥除去溶剂，残渣溶于水中制备混悬液、石油醚脱脂。脱脂后的混悬液采用乙酸乙酯萃取，萃取液干燥(68g)。萃取物过硅胶柱色谱(氯仿-甲醇系统，100∶0～2∶1)共分离得到70个馏分，合并第23～26馏分(3g)进一步用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱进行分离，最后采用制备型高效液相反向C₁₈色谱柱(乙腈-水系统，30∶70～40∶60)分离、纯化得到化合物HJB(20mg)。 

实施例2：HJB抑制白血病细胞株增殖。