[发明专利]桑螟β-呋喃果糖苷酶、编码基因、基因载体、菌株及应用

权利要求书

1.一种桑螟β-呋喃果糖苷酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.编码权利要求1所述的一种桑螟β-呋喃果糖苷酶的基因。

3.如权利要求2所述的一种编码桑螟β-呋喃果糖苷酶的基因，其特征为所述基因序列如SEQ ID NO.2所示。

4.权利要求2或者3所述的一种编码桑螟β-呋喃果糖苷酶基因在制备重组β-呋喃果糖苷酶中的应用。

5.权利要求2或者3所述的一种编码桑螟β-呋喃果糖苷酶基因的制备方法，该方法包括：提取桑螟中肠的总RNA，并反转录成cDNA作为模板，用简并引物克隆获得部分基因序列，然后用RACE方法获得长度为1762bp的cDNA全长基因，序列如SEQ ID NO.2所示，包含一个1467bp完整开放阅读框ORF。

6.如权利要求5所述的一种编码桑螟β-呋喃果糖苷酶基因的制备方法，其特征在于，所述简并引物和RACE方法用到的RACE引物如下：

简并引物：正向引物SUCdgpF如SEQ ID NO.3所示，

反向引物SUCdgpR如SEQ ID NO.4所示；

RACE引物：5’RACE外引物DpSuc1a-5RAgsp，如SEQ ID NO.5所示，

5’RACE内引物DpSuc1a-5RAngsp，如SEQ ID NO.6所示，

3’RACE外引物DpSuc1a-3RAgsp，如SEQ ID NO.7所示，

3’RACE内引物DpSuc1a-3RAngsp，如SEQ ID NO.8所示。

7.一种含有权利要求2或者3所述的一种编码桑螟β-呋喃果糖苷酶基因DpSuc1a ORF的重组质粒pET-24b/DpSuc1a，其特征在于，由含有双酶切位点的引物DpSuc1aF和DpSuc1aR对ORF进行PCR扩增后，将扩增产物和载体pET-24b分别经过BamHⅠ和XhoⅠ双酶切6h后进行连接获得；所述PCR方法中设计的两种扩增引物DpSuc1aF和DpSuc1aR分别如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。

8.由权利要求7所述的重组质粒转化BL21（DE3）感受态细胞得到的基因工程菌株。

9.一种含有如权利要求1所述的桑螟β-呋喃果糖苷酶的重组蛋白DpSUC1a，其特征在于，该重组蛋白是将重组质粒pET-24b/DpSuc1a转化至BL21感受态细胞，经扩大培养和诱导表达，超声破碎后纯化获得可溶性的重组蛋白。

10.如权利要求1所述的桑螟β-呋喃果糖苷酶的应用，所述应用为利用桑螟β-呋喃果糖苷酶的活性对具有β-呋喃果糖苷酶底物结构的物质进行转化。