[发明专利]一种动物核酸样本常温保存试剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及核酸样本保存试剂，尤其涉及一种动物核酸样本常温保存试剂及其应用。

背景技术

核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，为生命的最基本物质之一。核酸大分子可分为两类：脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸（RNA），在蛋白质的复制和合成中起着储存和传递遗传信息的作用。核酸不仅是基本的遗传物质，而且在蛋白质的生物合成上也占重要作用，因而在生长、遗传、变异等一系列重大生命现象中起决定性的作用。随着分子遗传中心法则揭示了核酸与蛋白质间的关系，对于核酸的分析研究实验如PCR、SNP等应用的范围日益广泛，其中在动物学、生物学上的应用研究尤甚。

目前针对核酸普遍采用的技术仍然是低温贮藏，采用该方法通常需要高要求的低温冰箱（如-80℃），通过低温防止核酸酶降解抑制核酸酶活性，来实现低温保存。但是，保存条件要求过高，同时也不利于核酸样本的采集及运输。

传统的核酸提取和保存途径主要有一下两种途径：一，现场采集组织核酸样本，立即提取核酸并低温保存；二，现场采集样本，低温冻存防止核酸酶降解，然后运送至实验室提取核酸后低温冻存。采用方法一的缺陷是采集现场需要离心机、超净工作台等实验室设备，对于野外采集样本或者不具备实验室条件的场所无法使用该方法提取和保存核酸。采用方法二对于组织样本的运输有着严格的低温要求，必须一直低温贮藏，成本较高。

同时，针对传统的动物核酸样本的采集方式一般是由政府检测机构上门检测，或者是由养殖企业进行送检。近年来，出现了跨地区病死动物病料、血样的邮寄、递送。这些病料的现场采集，均需要专门的检疫人员进行操作，成本高、效率低、运输需要冷链等，且存在着如病原随运输的扩散等多因素的生物安全隐患因素。随着生物基因工程技术的发展，越来越需要一种简便的采集方式，以及一种保存条件温和，能够常温下抑制核酸酶活性的核酸保存试剂，便于长期保存动物核酸样本的保存方法。

发明内容

本发明中，常温是指20-25℃。

本发明中，所称核酸包括：脱氧核糖核酸DNA以及核糖核酸RNA。

本发明中所涉及的动物核酸样本包括：动物组织样本、血液、粪便、尿液、唾液、以及相关组织液等。

本发明中，英文缩写如下：

DNA指脱氧核糖核酸；RNA只核糖核酸；

PCR指聚合酶链式反应，即Polymerase Chain Reaction；

SNP指单核苷酸多态性测序，即single nucleotide polymorphism；

SDS指十二烷基硫酸钠；RNase指核酸酶；

APP指猪传染性胸膜肺炎放线杆菌，即Actinobacillus pleuropneumoniae；

TE指含EDTA的Tris-HCl(PH8.0)缓冲液。

本发明的目的是提供一种动物核酸样本常温保存试剂以及该试剂在动物核酸样本常温保存中的应用。

为实现上述目的，一方面，本发明提供了一种动物核酸样本常温保存试剂，包含酸性细胞裂解剂，核酸酶抑制剂，表面活性剂，柠檬酸钠和醋酸钠，其中，所述细胞裂解剂为异硫氰酸胍，能够迅速破碎细胞，并且能够抑制细胞释放出来的核酸酶的活性；所述核酸酶抑制剂为8-羟基喹啉和β-巯基乙醇能够抑制核酸酶活性，所述表面活性剂为十二烷基硫酸钠(SDS)，SDS是一种已知的能够使蛋白质变性的表面活性剂,它可以用于核酸抽提操作中破坏细胞壁并裂解核酸-蛋白复合物。在较高的温度下破坏蛋白质与DNA结合，使DNA释放出来。柠檬酸钠和醋酸钠的主要作用是作为调节试剂的pH值。

优选地，所述动物核酸样本常温保存试剂的pH值为7.0～9.5。

优选地，酸性细胞裂解剂的质量浓度为0.125～0.250g/L。

优选地，8-羟基喹啉的质量分数为0.1%～0.5%，β-巯基乙醇的质量分数为0.5%～1%。

优选地，十二烷基硫酸钠的质量分数为5%～10%。

优选地，醋酸钠的摩尔浓度为0.01～0.05mol/L。

另一方面，本发明提供了一种使用上述动物核酸样本常温保存试剂处理滤纸的方法，包括以下步骤：

1)将滤纸在上述动物核酸样本常温保存试剂中浸泡；

2)将滤纸在37～50℃下烘烤；

3)灭菌，备用。

优选地，其中所选用的滤纸为903^#滤纸。