[发明专利]干扰SIRT1表达试剂在制备抑制肝癌干细胞干性转录因子表达的试剂中的应用

说明书

技术领域

本发明属于化学领域，特别涉及干扰SIRT1表达试剂在制备抑制肝癌干细胞干性转录因子表达的试剂中的应用。 

背景技术

肿瘤干细胞（cancer stem cells，CSCs）是存在于肿瘤中的一小部分具有干细胞性质的细胞群体，具有无限增殖、自我更新和多向分化潜能的细胞，是肿瘤发生、发展的根源。大量的研究表明，干细胞产生后通过本身固有的多能转录因子如Oct4，SOX2和Nanog调节外在的信号，从而使干细胞寄居在能够维持“干性”特性的微环境（niche）中，进而维持自我更新能力，这些多能转录因子对于维持干细胞的潜在多能性和介导细胞增殖等作用具有至关重要的作用。研究证实，多能转录因子Oct4，SOX2和Nanog三者之间形成一个反馈调节环路，活化并促进干细胞生长和自我更新，同时抑制分化基因的表达，但对于上述转录因子激发干细胞形成机制尚不明确。此外，研究发现多个蛋白编码基因，它们的产物参与了肿瘤干细胞“干性”维持和肿瘤的发生。因此，研究这些基因与多能转录因子的相互作用，对于研究肿瘤干细胞自我更新的作用机制具有重要的作用。 

在细胞内修饰组蛋白的酶类往往也是修饰转录因子的酶类,维持多能性的重要转录因子也受到翻译后修饰的调控。去乙酰化酶SIRT1通过调节基因的功能和转录从而决定细胞的命运，其调节基因的功能和转录主要以表观遗传的方式调节组蛋白活性（主要是H4K16和H3K9位点）和乙酰化修饰调节非组蛋白的表达特别是一些关键的转录因子如p53，FOXO，c-MYC，HIF1α、HIF2α等。新近研究发现，SIRT1在维持鼠胚胎干细胞（ESC）和人胚胎干细胞（HSC）自我更新作用中具有重要的作用。SIRT1通过乙酰化作用于p53，从而调节干细胞的多能转录因子Nanog、Oct4和SOX2的表达。在人和鼠造血干细胞中，SIRT1可通过能量代谢的改变调节转录因子的活性，进而维持造血干细胞的自我更新。然而，关于SIRT1在实体肿瘤干细胞中调节多能转录因子维持干细胞自我更新的作用尚未见文献报道。 

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供干扰SIRT1表达试剂的新用途，为肝癌的靶向治疗具 有重要意义。 

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案： 

干扰SIRT1表达试剂在制备抑制肝癌干细胞干性转录因子表达的试剂中的应用。 

优选的，所述干扰SIRT1表达试剂为干扰SIRT1表达的慢病毒或Tenovin-6。 

更优选的，所述Tenovin-6的浓度为2.5～10μM。 

优选的，所述干扰SIRT1表达的慢病毒由Lv-sh-SIRT1质粒转染293T细胞后，经包装、纯化而得。 

优选的，所述干性转录因子为SOX2、Oct4、c-Myc或Nanog。 

优选的，所述干性转录因子为SOX2或Nanog。 

本发明的有益效果在于：本发明公开了干扰SIRT1表达试剂在制备抑制肝癌干细胞干性转录因子表达的试剂中的应用，通过抑制肝癌肝细胞中干性转录因子，从而抑制肝癌干细胞的增殖、克隆形成、成球能力以及皮下移植瘤形成率，延缓体内肿瘤生长，抑制肝癌干细胞的自我更新。因此可以将干扰SIRT1表达试剂用于靶向治疗肝癌，对延长肝癌生存时间具有重要意义。 

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图： 

图1为干扰SIRT1表达后检测各干性转录因子的表达。 

图2为干扰SIRT1表达后不同时间检测干性转录因子的表达。 

图3为不同浓度TV-6处理细胞检测Nanog和SOX2的表达。 

图4为5μM TV-6处理肝癌干细胞后不同时间点检测Nanog、SOX2的表达。 

图5为在肝癌组织和肝癌细胞系中SIRT1与SOX2的表达。 

图6为干扰SIRT1过表达SOX2的蛋白表达情况（A：western-blot检测；B：免疫荧光检测）。 

图7为干扰SIRT1过表达SOX2对肝癌干细胞克隆形成和成球能力的影响。 

图8为干扰SIRT1过表达SOX2对NOD/SCID小鼠移植瘤的影响（A：移植瘤观察结果；B：移植瘤的重量和体积）。 

图9为免疫荧光和免疫组化分别检测移植瘤中GFP或SIRT1和SOX2的表达。