[发明专利]马尾连中两个含氯取代的抗肿瘤苄基异喹啉生物碱

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及从毛茛科唐松草属药用植物马尾连中提取分离得到的两种含有氯原子取代的并具有抗肿瘤活性的苄基异喹啉生物碱类化合物及其制备方法。

背景技术

生物碱类成分是毛茛科唐松草属（Thalictrum）植物中主要的化学成分，目前已报道的从该属植物中分离得到的生物碱类成分包括：简单异喹啉类、苄基异喹啉类、阿朴菲类、原小檗碱类、吗啡烷类等；此外还存在大量的生物碱二聚体。

唐松草属植物全世界有200余种，我国有67种，主要集中于西南地区。其中多叶唐松草（Thalictrum foliolosum DC.）是生长在中国西南地区海拔2300-3600米高原的民间草药和藏药，亦称“马尾连”，民间用于治疗痢疾、肠炎等消化系统疾病。唐亚林等报道（CN101306094A），马尾连粗提取物在50μg/mL浓度下对人肝癌细胞HepG-2、肝癌细胞BEL-7402、结肠癌细胞HCT-8、肺癌细胞A-549均有一定的抑制作用，其抑制率最高可达60%，但并未提及其中具有抗肿瘤活性的单体化合物。在已报道的唐松草属植物中分离得到的苄基异喹啉类生物碱未见抗肿瘤活性相关报道，同时，未见文献报道从马尾连中分离得到苄基异喹啉类生物碱。

本发明所涉及的在异喹啉结构C-3位为氯原子取代、并且在苄基片段苯环上存在乙烯基取代的新苄基异喹啉类生物碱化合物，迄今在国内外未见有与此雷同的化合物及活性的相关专利或文献报道。

发明内容

本发明提供两种以马尾连为原料提取分离的含氯原子取代的苄基异喹啉生物碱类化合物。

本发明又提供所述化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

本发明所述化合物的结构如式I和式II所示：

本发明的制备技术方案包括如下步骤：

取马尾连（Thalictrum foliolosum）药材，依次用5倍量体积分数为95%的乙醇加热回流提取两次，用体积分数为70%的乙醇加热回流提取一次，合并95%和70%乙醇提取液，减压回收至无醇味后，用浓盐酸调pH值为2-3，溶液经强酸型阳离子交换树脂柱色谱分离，用蒸馏水洗脱至洗脱液无色后，用树脂体积5-8倍量的浓度为2%的氢氧化钠乙醇溶液洗脱，洗脱液用浓盐酸调pH为5-6并减压浓缩至树脂体积一倍量后，用等体积氯仿萃取三次，萃取物经200-300目的碱性Al₂O₃柱色谱分离，以体积配比为100：0-0：100的二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱，其中体积配比为100：3的二氯甲烷-甲醇混合溶剂洗脱部分，经ODS柱色谱分离，以20%-100%的甲醇水溶液梯度洗脱，其中65%甲醇水溶液洗脱部分经Sephadex LH-20柱色谱纯化得到式I化合物，75%甲醇水溶液洗脱部分经Sephadex LH-20柱色谱纯化得到式II化合物。

所得化合物经过系统结构鉴定结果如下：主要利用包括高分辨质谱、核磁共振谱（¹H NMR，¹³C NMR，2D-NMR）。

式I化合物为白色无定形粉末（氯仿），易溶于氯仿、丙酮，碘化铋钾显色，提示其可能为生物碱，10%硫酸乙醇溶液显浅褐色。ESI-MS给出准分子离子峰m/z400.09[M+H]⁺，且在m/z402.0[M+H+2]⁺处显示同位素峰的丰度约为[M+H]⁺的1/3，推测分子中含有一个氯原子且含有氮原子；HR-ESI-MS（图1）给出准分子离子峰m/z：400.0949[M+H]⁺（calcd for C₂₁H₁₉ClNO₅，400.0946），结合NMR分析确定分子式C₂₁H₁₈ClNO₅。UV（MeOH）λmax：220，252nm。IR（KBr）ν_max cm^-1中显示3382cm-¹的羟基吸收峰，1614、1578cm^-1的芳香族伸缩振动吸收峰。