[发明专利]一种肉制品中植物源性转基因成分多重荧光定量PCR检测方法和检测试剂盒在审
申请号: | 201410033119.9 | 申请日: | 2014-01-24 |
公开(公告)号: | CN104388539A | 公开(公告)日: | 2015-03-04 |
发明(设计)人: | 邵彪;黄伟东;季葛振;罗鑫 | 申请(专利权)人: | 南通市产品质量监督检验所 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68 |
代理公司: | 北京一格知识产权代理事务所(普通合伙) 11316 | 代理人: | 滑春生 |
地址: | 226000 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 肉制品 植物 转基因 成分 多重 荧光 定量 pcr 检测 方法 试剂盒 | ||
1.一种肉制品中植源性转基因成分的多重荧光定量PCR检测方法,包括DNA提取和PCR检测两个步骤,其特征在于:所述的DNA提取步骤为将肉制品样品经剪碎或研磨均质后,按照组织基因组DNA提取方法进行DNA抽提;所述的PCR检测步骤为将所属CaMV 35S启动子、NOS终止子和标记基因NPTII的特异性引物和探针、预混荧光定量PCR反应体系、DNA模板和ddH2O按一定比例用量加入荧光定量PCR反应管,再将荧光定量PCR反应管放入荧光定量PCR仪进行扩增,扩增结束后搜集荧光信号,同时进行平行试验。
2. 根据权利要求1所述的肉制品中植源性转基因成分的多重荧光定量PCR检测方法, 其特征在于:所述的所属CaMV 35S启动子、NOS终止子和标记基因NPTII的特异性引物和探针的碱基排列顺序为:
CaMV 35S
反向引物: 5′- CGACAGTGGTCCCAAAGA - 3′
正向引物: 5′- AAGACGTGGTTGGAACGTCTTC - 3′
探针:5′FAM-TGGACCCCCACCCACGAGGAGCATC- TAMRA 3′;
NOS
反向引物: 5′- TCT TAAGATTGAA TCCTGTT - 3′
正向引物: 5′- ATTGCGGGACTCTAATCATA - 3′
探针:5′HEX-CAGAAATTATATGATAATCATCGCAAGTCC –TAMRA 3′;
NPTⅡ
反向引物: 5′- AGGATCTCGTCGTGACCCAT - 3′
正向引物: 5′- GCACGAGGAAGCGGT - 3′
探针:5′ROX-CACCCAGCCGGCCACAGTCGAT-TAMRA 3′。
3. 根据权利要求 1所述的肉制品中植源性转基因成分的多重荧光定量PCR检测方法,其特征在于:所述的PCR检测步骤中各组分的加入量如下表所示:
。
4.根据权利要求1所述的肉制品中植源性转基因成分的多重荧光定量PCR检测方法,其特征在于:所述的DNA模板为标准品或提取的DNA;所述DNA模板为标准品时作为阳性对照管; 所述DNA模板为提取的DNA时作为测试管。
5. 根据权利要求1所述的肉制品中植源性转基因成分的多重荧光定量PCR检测方法,其特征在于:所述标准品序列应包含以下序列:
CaMV 35S:AAGACGTGGTTGGAACGTCTTCTTTTTCCACGATGCTCCT CGTGGGTGGG GGTCCATCTTTGGGACCACTGTCG;
NOS:TCTTAAGATTGAATCCTGTTGCCGGTCTTGCGATGATTATCATTAATTTCTGTTGAATTACGTTAAGCATGTAATAATTAACATGTAATGCATGACGTTATTTATGAGATGGGTTTTTATGA TTAGAGTCCC GCAATTA;
NPTⅡ:GCACGAGGAAGCGGTCAGCCCATTCGCCGCCAAGCTCTTCAGCAATATCA CGGGTAGCCAACGCTATGTCCTGATAGCGGTCCGCCACACCCAGCCGGCCACAGTCGATGAATCCAGAAAAGCGGCCATTTTCCACCATGATATTCGGCAAGCAGGCATCGCCATGGGTC ACGACGAGAT CCT。
6. 根据权利要求1所述的肉制品中植物源性转基因成分多重荧光定量PCR检测方法,其特征在于:所述的荧光定量PCR仪设置的反应参数为95℃变性1min30s, 以95℃5s, 58℃30s, 72℃30 s扩增40个循环,设置58℃结束后开始收集荧光信号。
7. 一种权利要求1所述的肉制品中植物源性转基因成分多重荧光定量PCR检测方法中使用的试剂盒,其特征在于:所述试剂盒包括转基因调控元件、预混荧光定量PCR反应体系、标准品和ddH2O;所述的转基因调控元件包括所属CaMV 35S启动子、NOS终止子和标记基因NPTII的特异性引物和探针;所述的标准品包括CaMV 35S启动子、NOS终止子和标记基因NPTII的目标扩增片段。
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