[发明专利]一种人尿中检测香草扁桃酸的方法

权利要求书

1.一种人尿中检测香草扁桃酸的方法，其步骤包括：

1)取人尿液用HCl酸化，在-80℃条件下保存，尿液融化后用乙酸乙酯萃取、挥发，醋酸再溶解，可获得VMA粗提取物；

2)上述粗提取物经过HPLC分离，在UV检测器280nm波长下，获得稳定单一的VMA吸收峰，并通过外标法绘制VMA标准曲线，最终计算出VMA的含量。

2.根据权利要求1所述的人尿中检测香草扁桃酸的方法，其特征是：步骤1)具体如下：

a)收取新鲜尿液后，加入5M HCl酸化，放入-80℃冷柜中保存，直到开始后续实验；

b)待尿液融化后，取4ml尿液到一个预装有2g NaCl的15ml离心管内，上下颠倒混合10min形成饱和盐溶液；

c)加入4ml乙酸乙酯，上下颠倒混合5min；4000g离心5min，小心吸取上层有机相到一根新50ml圆底离心管内；

d)重复b-c步2次，获得上层有机相共12ml；

e)将离心管用金属加热器加热到45℃，在通风柜内高风挥发，直到所有的乙酸乙酯挥发完全，获得黄色或黑色沉淀；

f)加入400μl1％醋酸溶液，充分震荡，4℃过夜溶解；

g)15000g离心后，将上清液移到新1.5ml离心管内，4℃保存不超过1周，等待HPLC检测。

3.根据权利要求1所述的人尿中检测香草扁桃酸的方法，其特征是：HPLC条件为：

柱子：SP-C18(4.6mm*250mm，5um)；

流动相：A(水∶醋酸=98∶1)：B(水∶甲醇∶醋酸=68∶30∶2)梯度洗脱；

洗脱梯度：0-15min：100％A-20％A

15-20min：20％A

20-21min：20％A-100％A

21-35min：100％A

流速：0.8ml／min；

检测波长：UV280nm；

上样量：100μl。

4.根据权利要求1所述的人尿中检测香草扁桃酸的方法，其特征是：外标法绘制VMA标准曲线步骤如下：用电子分析天平称取VMA，用1％的醋酸配置成1ng／μl、2.5ng/μl、5ng/μl、10ng/μl、20ng／μl、100ng/μl的浓度梯度的VMA溶液，将这些浓度梯度的VMA溶液先后上HPLC柱检测，并根据其检测结果绘制标准曲线。