[发明专利]多肿瘤标志物联测用纸芯片酶联免疫测试卡

说明书

技术领域

本发明涉及免疫检测技术领域，具体地涉及一种能用于多肿瘤标志物联合检测的纸芯片酶联免疫测试卡。

背景技术

肿瘤标志物检测是近年来发展起来的一项肿瘤诊断的新手段，对于早期诊断、尤其是发现微转移有着独特的作用，但单一标志物的检测对肿瘤的诊断价值有限，而多指标联合检测可互补优缺点，提高阳性检出率。目前对多种肿瘤标志物的定量检测，主要依赖于传统的酶联免疫吸附法(ELISA)和化学发光酶联免疫法(CLIA)，要配备专用的试剂盒和免疫测定装置，涉及烦琐的溶液处理过程，消耗大量昂贵的抗体试剂，分析时间长且操作复杂，不利于实现多指标的临床现场快速检测应用。

微流控芯片是uTAS中当前最活跃的领域和发展前沿，它可以将多种单元技术在整体可控的微小平台上灵活组合、规模集成，能简化操作、增加分析速度和降低试剂消耗，有望为肿瘤标志物的定量检测提供简便快速有效的新方法和新器件。目前已有专利CN202083692U、CN202066861U等公开了基于微流控芯片的肿瘤快速诊断器件，可以分别用于测定胃癌、胰腺癌等癌症的多种肿瘤标志物；但这些微流控芯片仍是基于玻璃或塑料等构成的微通道，同时要集成多个检测电极，制作工艺复杂且成本较高。哈佛大学Whitesides小组以滤纸为基底材料构建了成本低的纸基微流控芯片(纸芯片)，并结合ELISA实现了对IgG的定量检测；济南大学于京华小组利用丝网印刷或蜡打印方式批量制作了阵列的纸芯片，结合CLIA实现了对癌胚抗原、PSA等肿瘤标志物的定量检测。与传统的酶联免疫分析法相比，这些纸芯片在检测成本、分析时间方面有明显改善，但在使用时仍需配备相应的试剂盒，给肿瘤诊断的临床现场应用带来不便。

发明内容

(一)要解决的技术问题

本发明的目的是提供一种为肿瘤诊断提供适合临床现场应用的器件，且制作简单、灵敏度高、成本低的多肿瘤标志物联测用纸芯片测试卡。

(二)技术方案

为达到以上目的，本发明提供一种多肿瘤标志物联测用纸芯片酶联免疫测试卡，包括上外壳、上层滤纸芯片、双面胶带、中间层滤纸芯片、下层滤纸芯片、纸基滑动架、以及下外壳，其上层滤纸芯片、中间层滤纸芯片、下层滤纸芯片分别是具有亲水区域、疏水区域交替出现的蜡图案化滤纸芯片；在上外壳和下外壳之间设置上层滤纸芯片、双面胶带、中间层滤纸芯片、下层滤纸芯片和纸基滑动架，在上外壳本体设有进样窗口和加液窗口，上层滤纸芯片位于上外壳和双面胶带之间，中间层滤纸芯片位于双面胶带和下层滤纸芯片之间；中间层滤纸芯片上包括预先固定有不同反应试剂的多个敏感区；纸基滑动架位于下层滤纸芯片和下外壳之间；上层滤纸芯片、中间层滤纸芯片通过双面胶带粘接为一体；下外壳的底部则开有与纸基滑动架对应的U形窗口，下层滤纸芯片相对上层滤纸芯片、中间层滤纸芯片在纸基滑动架上滑动，以便实现不同反应试剂在多层滤纸芯片之间的顺序流动；所述上层滤纸芯片含有进样孔、疏水蜡区域和上层液流通道；所述双面胶带含有引流通道和多个引流孔；所述中间层滤纸芯片含有中间层液流通道和多个敏感区；所述下层滤纸芯片由多个测试孔和不同刻度线、手柄组成；进样窗口、进样孔、引流通道以及中间层液流通道均位于测试卡的左侧，且各中心垂直线沿测试卡的垂直竖向方向重合；上层液流通道是位于上层滤纸芯片的右侧区域上的梳子形液流通道，其梳背紧贴于加液窗口下方且两者的中心重合，其梳齿与双面胶带上的多个引流孔和中间层滤纸芯片上的多个敏感区沿测试卡的垂直竖向方向重合；在下层滤纸芯片上设置有多个测试孔、不同刻度线和手柄，测试孔紧贴于中间层液流通道下方且两者的中心重合，不同刻度线为平行于测试孔、用于标识下层滤纸芯片的滑动位置的多组虚线，手柄位于下层滤纸芯片上远离测试孔的一端。

(三)有益效果

该测试卡预先固定有不同酶联免疫反应试剂，使用时无需另外配备试剂盒，直接利用纸芯片的滑动来控制待测标志物与不同反应试剂的顺序接触和反应，通过结合便携式光学仪表，即可实现对多种肿瘤标志物的快速定量检测。

1、本发明在一个物理器件即纸芯片上集成了成熟的酶联免疫分析技术，将不同试剂预先固定在中间层滤纸芯片上，利用上层滤纸芯片的液流沟道和下层滤纸芯片的滑动来实现液体在多层滤纸芯片之间的顺序流动，不仅保留了酶联免疫分析的高特异和高灵敏度，还大大改善了酶联免疫分析在现场检测中的便携性和可操作性，利于拓展酶联免疫分析在肿瘤诊断检测中的现场应用。

2、采用喷蜡打印制作滤纸芯片图形的方式，可实现纸芯片酶联免疫测试卡关键部件的批量制作，降低了制作成本，提高了测试卡制备和检测的重复性。