[发明专利]一种葡萄糖的比色检测方法

说明书

技术领域

本发明属于葡萄糖检测技术领域，具体涉及一种葡萄糖的比色检测方法。

背景技术

近年来由于饮食结构的改变、生活节奏的日趋紧张以及少动多坐的生活方式等诸多因素的影响，全球糖尿病的发病率增长迅速，使糖尿病成为继肿瘤、心血管病变之后第三大严重威胁人类健康的慢性疾病。血清中葡萄糖含量的检测是临床检验和监控糖尿病的主要手段。目前用于血清葡萄糖含量检测的国家卫生标准参考方法（标准号：WS/T 350-2011）是采用己糖激酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶联合的方法。这些天然酶在温和条件下具有较高的底物特异性和催化效率，但是天然酶存在纯化困难、易失活、不易保存、价格较高等缺点。在目前已经公布的葡萄糖含量检测相关专利中，主要为电化学方法（专利号：200710176028.0；专利号：200910067282.6；专利号：201010617684.1；专利号：201110083906.0；专利号：201110391001.X；专利号：201110343243.1；专利号：201110345081.5；专利号：201220071992.3；专利号：201210189645.5；专利号：201210416267.X；专利号：201310087177.5；专利号：201310141232.4；专利号：201310290148.9；专利号：201310354574.4）。电化学检测灵敏度高，但是容易受到血氧以及血液中其他电活性物质的干扰，而且在检测过程中需要消耗一定的能量，另外，电极的制备往往较为复杂且无法直观判断血清葡萄糖含量，需要专门的仪器。其他检测葡萄糖的方法如共振散射光谱法（专利号：200810073470.5）、近红外光谱法（专利号：98100787.2）、化学发光法（专利号：200910236714.1；专利号：201210509888.2）、荧光光谱法（专利号：200680029822.6；专利号：201310250093.9）等都需凭借昂贵的专业仪器并且在专业技术人员的操作下才能完成对葡萄糖的检测。而葡萄糖快速测定的相关试剂盒（专利号：201210459910.7）、试纸（专利号：200410033020.5；专利号：201210579953.9）等因其构造复杂，制作过程繁琐，价格昂贵，在实际应用中也受到很大的限制。基于酶催化体系的比色检测法是近年来较热门的检测方法，它利用反应过程中体系颜色及色度的变化实现对目标物的检测，具有检出限低，灵敏度高的优点，但是常需要使用过氧化物酶（HRP），而过氧化物酶价格较高、易失活、不易保存。因此，又有人提出基于模拟酶检测血清葡萄糖的方法。自中国科学院阎锡蕴课题组发现纳米材料四氧化三铁具有类过氧化物酶催化活性(Nature Nanotechnology，2007，2，577-583)以来，汪尔康等人利用该特性实现了对过氧化氢和葡萄糖的检测（Analytical Chemistry，2008，80，2250-2254），氧化石墨烯也被发现具有类过氧化物酶活性，并已应用于过氧化氢和葡萄糖的检测（Advanced Materials，2010，20，2255-2262）。在申请的专利中，人们也提出基于模拟酶比色检测葡萄糖的方法（专利号：201110275358.1；专利号：201310244132.4；专利号：201310260524.X）。然而这些方法成本高、颜色变化较为单一、不易保存携带。

发明内容

本发明的目的在于提供一种葡萄糖的比色检测方法，利用葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖生成过氧化氢，再以二硫化钼为催化剂催化过氧化氢与显色剂的显色反应来检测葡萄糖，可解决现有技术中对葡萄糖检测的操作要求高，检测过程复杂，检测成本高，检测时间长，背景干扰大等问题，本发明的方法成本低、操作简便、能够实现可视化快速检测样品中葡萄糖的含量。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种葡萄糖的比色检测方法，是将样品经预处理，加缓冲液稀释后与葡萄糖氧化酶混合，反应生成过氧化氢，然后加入二硫化钼溶液、显色剂和缓冲液进行显色反应，采用目视比色法，将反应后的溶液颜色与比色标准系列进行比较，或在显色反应后加入硫酸溶液终止反应，再采用目视比色法半定量测定葡萄糖的浓度。

所述比色标准系列的制备是将葡萄糖标准品加缓冲液稀释，配制成已知的不同浓度的葡萄糖标准溶液与葡萄糖氧化酶混合反应后，加入二硫化钼溶液、显色剂和缓冲液进行显色反应即得比色标准系列，或在显色反应后加入硫酸溶液终止反应得到比色标准系列。