[发明专利]抗CA242单克隆抗体产生的杂交瘤及化学发光免疫分析试剂盒的制备

说明书

【技术领域】

本发明涉及CA242单克隆抗体产生的杂交瘤及检测血清中CA242含量的试剂盒，可广泛应用在医学和及生物化学技术领域。 

【背景知识】 

CA242抗原是一种新的糖类肿瘤标志物，在恶性肿瘤患者血清中CA242都有较高的阳性检出率。正常人体胆管细胞、胰管细胞中含少量CA242。但CA242主要存在于胰腺和结肠的恶性肿瘤细胞中，胰腺肿瘤细胞CA242免疫荧光明显强于邻近正常胰腺细胞。CA242对胰腺癌和直肠癌是一种有价值的新的肿瘤标志物。但CA242对肝癌和胃癌的诊断率较低。至今也没有一种标志物能对某种肿瘤完全特异，所以仅仅通过某一种单项肿瘤标志物检测诊断肿瘤的准确率较低，不能广泛应用于肿瘤的早期检测，但是有研究表明，采用多种肿瘤标志物的联合检测，可以弥补上述不足。如同其他肿瘤标志物CEA、CA199、CA50、CA125等联合应用，有助于提高阳性诊断率，减少临床的漏诊率。 

临床研究表明，在胰腺癌及晚期结直肠癌患者血清中，CA242普遍有显著的升高，对结直肠癌而言，CA242显示出比CA50及CA199具有更高的灵敏性；在CA50的对照研究中显示，对于Dukes各期肿瘤的检测均有更高的灵敏性，且随临床病期的进展而显著增高。用高亲和力的CA242单克隆抗体检测血清中的CA242，其原理基于C242可与粘蛋白表面的抗原CA242特异性结合，经标记后利用免疫血清学方法检测，这比以往检测CA199及CA50特异性更高。 

CA242作为胰腺癌和结直肠癌相关的肿瘤标志物，在临床诊断、监测及手术预后方面的作用十分突出。它的检测方法简便可行，因此在临床上具有很好的应用价值。同时，CA242可作为一种肿瘤标志物协助多种恶性肿瘤的诊断、指导治疗以及判断预后。 

【发明内容】

本发明的目的在于提供一种抗CA242单克隆抗体产生的杂交瘤以及建立一种简单且具高灵敏度的检测CA242的方法，并将该方法应用胰腺癌和结直肠癌的早期筛查。以解决现有的单克隆抗体检测CA242的灵敏度不够或价格昂贵，不适合临床大规模的应用的缺点。 

本发明的另一目的在于提供一种CA242化学发光免疫分析测定试剂盒以及该试剂盒的制备方法。利用该试剂盒分析检测灵敏度高、特异性强。 

本发明获得了能够产生特异性识别CA242的单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株4-1与杂交瘤细胞株4-5，此2株细胞株分别在2014年1月19日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏地址是，中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:C201419与CCTCC NO:C201420。此外，经过鉴定，两株单克隆抗体分别识别CA242的两个不同表位，通过4-1与4-5的结合建立了双抗体夹心酶联免疫反应方法，其是一种高灵敏度及高通量的检测系统。 

因此，本发明提供了下面所述的1至7的内容： 

1.抗CA242的杂交瘤细胞株，其保藏号分别为CCTCC NO:C201419和CCTCC NO:C201420。 

2.抗CA242的单克隆抗体，分别由保藏号为CCTCC NO:C201419和CCTCC NO:C201420的杂交瘤细胞系所分泌，所述单克隆抗体命名为4-1和4-5。 

3.如权利要求2所述的抗CA242单克隆抗体的应用，即利用所述的单克隆抗体的双抗体夹心法ELISA检测CA242，夹心法两两配对的抗体来源于保藏号为CCTCC NO:C201419杂交瘤分泌的抗体4-1和保藏号为CCTCC NO:C201420杂交瘤分泌的抗体4-5，其步骤包括： 

（1）以所述的两两配对的单克隆抗体4-1包被； 

（2）加入待测样品孵育； 

（3）以所述的两两配对的HRP标记的另一株单克隆抗体4-5作为二抗，加入反应体系； 

（4）洗涤后加入酶反应底物，以450nm读取OD值； 

（5）结果表明检测的灵敏度很高。 

4.一种检测血清中CA242含量的试剂盒，包括:包被有抗CA242单克隆抗体4-1的不透明聚苯乙烯板；CA242抗原系列标准品；酶标记的CA242单克隆抗体4-5；上述酶所作用的化学发光底物A液和B液以及洗涤液。