[发明专利]减毒瘟病毒

说明书

本申请是申请日为2009年06月24日、中国申请号为200980124328.1、发明名称为“减毒瘟病毒”的发明申请的分案申请。

发明背景

技术领域

本发明涉及动物健康领域，尤其涉及减毒瘟病毒(pestivirus)，如传统猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)，牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)或边界病病毒(border disease virus,BDV)。

背景信息

瘟病毒在世界上许多国家是具有重大经济影响的动物疾病的起因。现已知的病毒分离物分属四个不同种，它们一起形成黄病毒科(Flaviviridae)的一个属。

I/II牛病毒性腹泻病毒(BVDV)1型(BVDV-1)和2型(BVDV-2)引起牛的病毒性腹泻(BVD)和家畜(cattle)的粘膜疾病(MD)(Baker,1987;Moennig and Plagemann,1992;Thiel et al.,1996)。BVDV区分成2个种是基于基因组序列的明显不同(概述见Heinz et al.,2000)，从有限的交叉中和抗体反应也可以明显看出它们的区别(Ridpath et al.1994)。

III传统猪瘟病毒(CSFV)以前称作猪霍乱病毒，引起传统猪瘟(CSF)或猪霍乱(HC)(Moennig and Plagemann,1992;Thiel et al.,1996)。

IV边界病病毒(Border disease virus,BDV)一般发现于羊，引起边界病(BD)。BDV宫内感染小羊后，被持续感染的小羊可以出生，但很虚弱，并表现出不同的异常情况，其中最为人熟知的是“长毛摇摆(hairy shaker)”综合征(Moennig and Plagemann,1992;Thiel et al.,1996)。

瘟病毒是小的有包膜病毒，其正链单链RNA基因组既缺失5’帽也缺失3’poly(A)序列。该病毒基因组编码一种约有4000个氨基酸的聚蛋白，它通过细胞蛋白酶和病毒蛋白酶参与的翻译中加工和翻译后加工产生最终裂解产物。病毒蛋白在该聚蛋白中按NH₂-N^pro-C-E^rns-E1-E2-p7-NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B-COOH顺序排列(Lindenbach and Rice,2001)。蛋白C(＝核心蛋白或衣壳蛋白)以及糖蛋白E^rns、E1和E2代表瘟病毒颗粒的结构成分，已有人在CSFV中予以证明(Thiel et al.,1991)。BVDV中也是如此。有人发现E2是抗体中和的靶，E^rns也是，但程度较低(Donis et al.,1988;Paton et al.,1992;van Rijn et al.,1993;Weiland et al.,1990,1992)。E^rns缺乏典型的膜锚着结构，可从感染的细胞大量分泌，有报道称这种蛋白表现出RNA酶活性(Hulst et al.,1994;Schneider et al.,1993;Windisch et al.,1996)。这种酶活性对于病毒生命周期的功能目前还不清楚。这种酶活性依赖于两个氨基酸链的存在，这两个链在瘟病毒E^rns以及植物来源和真菌来源的不同的已知RNA酶之间是保守的。这两个保守序列都含有组氨酸残基(Schneider et al.,1993)。灭活E^rns内部的RNA酶活性，得到减毒的无致病性(apathogenic)瘟病毒，其能用作改良的活疫苗(WO99/64604)。

瘟病毒糖蛋白E^rns在病毒体表面以及在感染细胞中表达为二硫键相连的同型二聚体。最C端半胱氨酸残基在两个E^rns单体之间形成分子间二硫键，导致形成E^rns同二聚体(Schneider et al.,1993)。最近有报道称，将CSFV最C端半胱氨酸取代为丝氨酸导致活力CSFV，但其缺乏形成任何E^rns同二聚体的能力(van Gennip et al.,2005)。