[发明专利]一种产庆大霉素A工程菌及其应用有效
| 申请号： | 201410035981.3 | 申请日： | 2014-01-26 |
| 公开（公告）号： | CN103805544A | 公开（公告）日： | 2014-05-21 |
| 发明（设计）人： | 洪文荣;陈洲琴;肖剑萍 | 申请（专利权）人： | 福州大学;福州市鼓楼区荣德生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N15/74;C12P19/50;C12R1/31 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350108 福建省福州市*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 庆大霉素 工程 及其 应用 | ||
1.一种产庆大霉素A 工程菌，其特征在于：所述工程菌为灭活genD1基因功能的绛红色小单孢菌(Micromonospora purpurea) KD1989，该菌株已于2013年12月18日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保蒇，保藏编号为CGMCC No.8598。
2.一种如权利要求1所述的一种产庆大霉素A 工程菌的构建方法，其特征在于：通过基因敲除方法阻断绛红色小单孢菌中genD1基因，主要包括以下步骤：
A、genD1基因穿梭质粒pGD14的构建；
B、质粒pGD14转化绛红色小单孢菌；
C、转化子的筛选；
D、工程菌株产物的鉴定。
3.根据权利要求2所述的一种产庆大霉素A 工程菌的构建方法，其特征在于：置换方法为：经PCR扩增分别获得genD1基因上下游各2000-2200bp的片段作为同源交换臂，将这两个片段连接到穿梭载体pKC1139上，载体pKC1139上的安普霉素抗性基因可用做筛选标记。
4.根据权利要求2所述的一种产庆大霉素A 工程菌的构建方法，其特征在于：所述的转化是以EcoliET12657/pUZ8002介导的结合转移方法。
5.根据权利要求2所述的一种产庆大霉素A 工程菌的构建方法，其特征在于：所述的筛选为：先筛选同时含安普霉素抗性的单交换菌株，再经松弛培养，筛选不含安普霉素抗性的双交换菌株。
6.根据权利要求2所述的一种产庆大霉素A 工程菌的构建方法，其特征在于：所述的鉴定是通过MS质谱分析。
7.一种如权利要求1所述的产庆大霉素A 工程菌在制备抗菌药物中的应用。
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